益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

摘要

目的:通过TGF-β1孵育A549细胞,构建上皮间质转化发生的研究平台,验证益气除痰方可以通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化.rn 方法:1.将肺腺癌细胞株A549长期暴露在TGF-β1环境中,诱导其发生EMT,构建肺癌细胞株A549发生EMT的研究平台A549-M.2.相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞侵袭转移能力;Western-blot蛋白检测法检测各组细胞EMT相关蛋白及TGFβ信号通路蛋白Smad2/3的表达.rn 结果:1.A549细胞中加入TGF-β1(10ng/mL)24h后可出现典型的EMT形态,长期TGF-β1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,撤掉TGF-β1后,形态可维持5d,随传代换液恢复上皮细胞形态.2.①镜下观察细胞形态显示,10ng/mL的TGF-β1作用于A549细胞24h可见细胞由立方形上皮形态转变为细长梭形,益气除痰方含药血清可以抑制该过程.②划痕实验结果显示:与空白血清组相比,TGF-β1+空白血清组迁移率为45.33％,TGF-β1+含药血清组迁移率为14.67％.④Western-blot蛋白检测显示TGF-β1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达而益气除痰方含药血清可以干预Smad2/3通路抑制该过程.rn 结论:1.TGF-β1可以诱导人肺腺癌A549细胞形态发生上皮向间质细胞形态转化,细胞侵袭迁移能力增强.2.益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化.