新型近红外荧光探针MeCy5-Osu衍生毛细管电泳分离激光诱导荧光检测磷酸化氨基酸

摘要

蛋白质磷酸化作用是通过对蛋白质上的氨基酸进行磷酸盐的酯化作用来改变蛋白质的构象,进而影响蛋白的活性和稳定性.蛋白磷酸化的作用与功能研究日渐成为细胞生物学和生物医药科学的焦点.它在以蛋白质为基础的生命过程中起着关键的调节作用.这些过程包括:细胞的分化和繁殖、基因表达以及一系列的代谢过程.在真核细胞中,最典型的磷酸化作用的接受体为含羟基的氨基酸,而常见的含羟基的氨基酸主要有丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)和苏氨酸(Thr).因此,测定磷酸化蛋白质和磷酸化氨基酸对深入了解和研究细胞生物学和生物医学具有十分重要的意义.目前测定蛋白质磷酸化传统方法是放射性同位素32P示踪法,但此方法有放射性的危害.毛细管电泳由于具有高效、快速、样品量少等优点,成为近几年来广泛使用的一种分离手段.用毛细管电泳分离紫外可见方法检测磷酸化氨基酸也有报导,但灵敏度较低,所需的蛋白样品量较大,给那些蛋白量少或难于提纯的蛋白质的分析带来不便.激光诱导荧光检测(LIF)是毛细管电泳所有检测方法中最灵敏度的检测方法之一,检测限可达10-13 mol L-1.因此,本文研究用荧光探针标记磷酸化氨基酸、毛细管电泳分离、激光诱导荧光检测可用于测定微量级样品中痕量磷酸化氨基酸的目的。