SEC-ICP-MS结合同位素稀释技术分析金属蛋白

摘要

随着金属组学(Metallomics)概念的提出，为了研究生物体内的金属蛋白、金属酶和其它金属结合分子的化学组成，探讨金属蛋白等分子所担负的生命活动的机理，发展新的可以分析生物体内金属元素不同形态及其与生物活性分子相互作用的技术和方法是十分重要的。高效液相色谱(HPLC)与电感耦合等离子质谱(ICP-MS)的联用技术被认为是金属组学中理想的分析方法之一。rn 由于ICP-MS具有简便而快速地分析同位素比值的能力，同位素稀释法(Isotope dilution)可方便地应用于HPLC-ICP-MS联用技术。柱后同位素稀释法(Post-column isotope dilution)是在样品经色谱分离后，在线加入待测元素的同位素稀释剂(Spike)，再进入质谱检测，完成同位素稀释分析的方法。应用柱后同位素稀释法，不但可以消除因仪器漂移而产生的偏差，更重要的是可以对色谱分离所得到的未知结构的元素形态准确地定量，而这种定量能力，正是擅长于结构分析的有机质谱所缺乏的。 在本实验中，使用尺寸排阻色谱(SEC)与ICP-MS联用，结合柱后同位素稀释法，分析了两种金属蛋白的混合物(超氧化物歧化酶CuZZn2-SOD和金属硫蛋白Zy-MT)。又根据每种蛋白所含金属的计量比，算出两种蛋白质的绝对量，并与其实际的称量质量进行了对比。