五步蛇毒亲和纯化丝氨酸蛋白酶

摘要

本实验建立了一种在工业规模上从五步蛇毒纯化丝氨酸蛋白酶的方法。作为亲和配体,L-精氨酸被合成到介质上,并且由ESI-MS分析确定其结构。在整个纯化过程中,主要的亲和层析步骤可以去除95％以上的其他蛋白,在接下去的DEAE离子交换层析精制过程中,其他的微量蛋白被去除。这个蛋白的纯度在HPLC Vydac C4柱分析中达到100％,在G3000SW柱分析中达到99.4％,在SDS-PAGE分析中达到99.7％。从粗蛇毒开始的蛋白回收率达到3.6％;纯化所得丝氨酸蛋白酶的纤维蛋白原凝结活性以及精氨酸酯酶活性的回收率分别达到82.2％和84％,高于其他文献的报道。此外,该蛋白酶也表现出精氨酸酰酶活性,在还原性SDS-PAGE分析中该蛋白的表现分子量在～40Kd。纯化所得蛋白酶在和亲和介质的吸附实验中,解离常数Kd和理论最大吸附量Qmax分别为9.93*10<'-5>mg/g介质和38.1mg/g介质.