不同大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液抗缺血及再灌注神经元损伤的比较研究

摘要

目的：通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)的检测,观察"解毒通络"药物干预后的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液(cerebral microvascular endothelial cells conditioned medium, CMECs-CM)特征及其抗缺血及再灌注皮质神经元损伤的效应,探讨脑微血管内皮细胞(cerebral microvascular endothelial cells, CMECs)调控神经元功能的可能机制。方法 (1)通络救脑注射液(TongluoJiunao injection, TLJN)作用于正常、缺血、缺血再灌注3种培养状态的大鼠脑皮质微血管内皮细胞,分别收集有药物干预及无干预的3对无血清内皮细胞条件培养液,并测定其LDH值。(2)同步原代培养大鼠脑皮质神经元,亦分为正常、缺血、缺血再灌注3组,用低(10﹪)、中(50﹪)、高(100﹪)3种浓度的各类脑微血管内皮细胞条件培养液(CMECs-CM)分别作用上述3种培养状态的神经元,测定其LDH漏出率。结果 (1)比较TLJN干预后的CMECs-CM与无干预的CMECs-CM中LDH漏出值,CMECs缺血组(ischemia, Is)与缺血再灌注组(ischemia/reperfusion, I/R)经药物干预后均明显降低(P<0.01)。(2)对于缺血神经元,缺血内皮细胞条件培养液(conditioncd medium of ischemic CMECs, Is-CM)高浓度(100﹪)和TUN干预后的缺血内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic CMECs with drug treat, IsT-CM)高浓度(100﹪)作用后表现为增加LDH漏出率(P<0.01),而低浓度10﹪的IsT-CM组则降低LDH漏出率(P<0.05);对于缺血再灌注神经元,与对照组比较,各类CMECs-CM作用后均能降低神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异,均以10﹪或50﹪的CM降低损伤为佳,正常内皮细胞条件培养液(conditioned medium of normal CMECs, N-CM)及缺血再灌注内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic/reperfusional CMECs, Rp-CM)组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对于正常神经元,各类CMECs-CM作用后均增加了神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异,正常脑微血管内皮条件培养液(conditioned medium of normal CMECs, N-CM)组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 (1)通络救脑注射液能够防御脑微血管内皮细胞缺血及缺血再灌注的损伤。(2)通络救脑注射液可以通过内皮细胞介导发挥抗缺血及缺血再灌注神经元损伤的效应。提示CMECs-CM及TLJN干预后的CMECs-CM均存在着抗缺血再灌注神经元损伤的活性物质。