人T淋巴细胞CD3ε链在大肠杆菌中的融合表达及初步鉴定

摘要

目的：构建含人CD3ε基因的重组表达质粒，并在大肠杆菌BL21中进行表达。rn 方法：RT-PCR扩增健康成人外周血单个核细胞的CD3ε基因，将其插入克隆载体PCR(@)-Ⅱ，测序并双酶切后，再将目的基因片段重组人表达载体PGEX4T-3，转化大肠杆菌BL21，经IPTC诱导，表达人CD3ε-GST融合蛋白，并经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。rn 结果: IPTG诱导含重组质粒的大肠杆菌BL21经SDS-PAGE出现明显的46KD蛋白条带并能与兔抗人CD3ε多抗产生特异性反应。rn 结论: 成功构建了人CD3ε-GST(hCD3ε-GST)原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达出人CD3ε-GST融合蛋白，为制备抗人CD3ε单克隆抗体奠定了基础。