成人骨髓间充质干细胞的分离和鉴定

摘要

目的：本实验拟通过体外细胞培养将间充质干细胞自骨髓血中分离出来,并加以纯化、鉴定,进一步在体外的培养条件下研究其增殖及生长的特性,从而探讨为组织工程化血管研究提供种子细胞的可能性。方法 收集成人骨髓血,采用密度梯度离心和贴壁生长的方式,提取单个核细胞进行体外培养;收集第2～3代(P<,2>~P<,3>)细胞行流式细胞仪检测细胞抗原表达(CD34、CD45、CD11a,CD14、KDR、 CD105、HLADR);采用细胞计数的方法,绘制原代培养和传代培养细胞的生长曲线。结果 通过密度梯度离心和贴壁生长的方法,可以获取具有一定形态特点、贴壁生长、增殖活跃的骨髓间充质干细胞;该细胞表达KDR、CD105,但不表达CD34、CD45、CD11a,CD14、HLADR等:原代培养曲线显示,第2～6 d为生长潜伏期,第7~8d开始,贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆,第8～10 d进入对数增长期;第12～14 d进入个平台期:传代培养的细胞多于P<,10>后开始出现衰老的现象,传代培养的潜伏期为24～48 h,传代培养的对数增长期为4～6 d,接种后8～9 d,细胞的增殖、生长逐渐缓慢,进入平台期。结论 1.利用密度梯度离心和贴壁的方法可以获取较高纯度的BMMSCs;2.该BMMSCs具有大量增殖的功能,可满足组织工程种子细胞的需要:3.BMMSCs表达CD105、KDR,不表达HLA-DR、CD34、CD45、CD11a、CD14。