艾克清胶囊对荷瘤小鼠免疫功能的影响

摘要

目的：观察艾克清胶囊对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：实验于2005-08/12在河南中医学院药理毒理学研究室完成。1瘤株:小鼠肺癌(Lewis),由中国医学科学院实验动物中心引入。药物:艾克清胶囊内容物(由河南中医学院制剂研室提供,批号20041218),配制成含0.5％的羧甲基纤维素纳(CMC-Na)混悬液0.1g/ml(相当于0.3g生药/ml);香菇多糖(湖北迪晨药业有限公司,批号20030101)。[2]取昆明种小白鼠150只,每只小鼠腋下注入小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.2ml(8.6*106/ml细胞数),分别用于以下3项各自独立的实验。每项实验选用50只小鼠,随机分为5组:艾克清低剂量组:1.0g/kd/d(相当于临床用量8.7倍),灌胃;艾克清中剂量组:2.0g/kd/d(相当于临床用量17.4倍),灌胃;艾克清高剂量组:4.0g/kd/d(相当于临床用量34.8倍);香菇多糖组:0.04g/kg/d,灌胃;空白对照组:灌胃同体积生理盐水;[3]艾克清对荷瘤小鼠网状内皮系统(RES)吞噬功能的影响实验:每天给药一次,连续给药10天,末次给药后1h,立即尾静脉注射1％明胶溶液稀释的25％印度墨汁0.1ml/10g,于注射后1、10分钟(秒表记录)分别用一次性采血管眼眶采血20μl,采血后立即吹入盛有0.1％Na<,2>CO<,3>液2ml试管中,备用。另取正常小鼠血液20μl溶于0.1％Na<,2>CO<,3>溶液中校零,用752-N型分光光度计在675nm处测定其光密度。并于第二次采血后,用脱颈椎方法将小鼠处死,称体重,解剖取肝、脾称重,计算出单位时间内炭粒廓清率即吞噬指数K及吞噬系数α。[4]艾克清对荷瘸小鼠T淋巴细胞酯酶染色率的影响实验:每天给药一次,连续给药10天,末次给药后1h,眼眶静脉丛取血,采置到干净的玻片上,迅速推成均匀的血涂片,自然干燥;解剖各鼠,取脾脏、胸腺分别称重。将血涂片浸入已预热30分钟的孵育液中37℃孵育3小时,并用自来水冲洗3～5分钟,去掉沉渣,用滤纸吸干水珠。然后将片子置于1/15mol/L PH7.6的PBS缓冲液89ml中并缓滴入六偶氮副品红液6ml,充分混匀后再滴2％醋酸萘钠溶液2.5ml,边滴边摇,用冰醋酸调PH至6.4。再加1％孔雀绿溶液复染5～10秒,自来水冲洗,滤纸轻轻吸拂,自然干燥。油镜观察并计算T淋巴细胞酯酶染色率。[5]艾克清对绵羊红细胞致小鼠溶血素抗体生成的影响实验:每天给药一次,连续给药8天。于第2次药后,每鼠腹腔注射绵羊红细胞(SRBC)悬液0.2ml/只(SRBC约2亿个/ml)进行免疫。于免疫后6天,眼眶取血,分离血清,用生理盐水稀释好的血清样品1ml(稀释500倍,此时小鼠血清中的补体可忽略不计)加入反应管内,再加入10％0.5ml绵羊红细胞(约10亿个),置冰浴中,并于每管中加入1ml生理盐水1:10稀释过的豚鼠血清,随即移置37℃恒温水浴血奋战中保温10分钟,孵毕放冰浴中终止反应,用2000r/min离心10min,取上清液;同时取SRBC稀释液作空白对照管,于540nm处分别测定每管吸收度值(0D),计算每个样品的半数溶血值(HC<,50>)。结果：150只小鼠均进入结果分析。[1]克清对荷瘤小鼠的吞噬指数K及校正吞噬指数α均有显著的增强作用,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。[2]艾克清能升高荷瘤小鼠T淋巴细胞酯酶染色率,且随着艾克清剂量的增加而升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。[3]艾克清可提高荷瘤小鼠的溶血素抗体生成,与空白对照组有显著性差异(P<0.01)。结论：艾克清可升高荷瘤小鼠网状内皮系统吞噬指数K及校正吞噬指数α,升高T淋巴细胞酯酶染色率,提高溶血素抗体生成,增强荷瘤小鼠的免疫功能。