检测猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR方法的建立

摘要

针对猪圆环病毒2型ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以猪圆环病毒2型的PK-15细胞培养物的DNA提取物为模板,分别扩增499bp和131bp的片段,成功建立了检测猪圆环病毒2型的TaqMan荧光PCR方法。结果表明:TaqMan荧光PCR检测PCV2的最佳探针浓度为0.5 pmol/μl；TaqMan荧光PCR两步法操作可快捷,扩增131bp的引物PCD1101/PCR1232检测有更高的敏感性(3.17×102拷贝/μl),有很好的重复性；在诸多检测样品中,只能检测到猪圆环病毒2型,针对猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV),日本乙型脑炎病毒(JEV),猪伪狂犬病毒(PRV),猪瘟病毒(HCV)及PK-15细胞阴性对照系统结果均为阴性,表明特异性好；与普通PCR的检测结果(2/10)比较,本方法的敏感性和对临床样品的阳性检出率(3/10)更高。上述研究表明,本方法快速、敏感、特异,具有很高的重复性,且可实时监测,从而有效检测猪圆环病毒2型。