鸡L-FABP基因融合蛋白表达及抗血清制备

摘要

本文旨在制备鸡肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)的多克隆抗血清,并分析L-FABP的组织表达特性。采用PCR扩增L-FABP序列,构建鸡L-FABP原核表达质粒PGEX-L-FABP。IPTG诱导其在大肠杆菌中融合表达,经过亲和层析纯化后,作为抗原对家兔进行皮下免疫注射。结果表明,[1]SDS-PAGE凝胶电泳结果显示一条40kDa(14kDa L-FABP+26kDa GST)的融合蛋白带；[2]鸡L-FABP基因多克隆抗体能够与内源性L-FABP蛋白发生免疫反应；[3]组织表达特性分析表明鸡L-FABP基因在肝脏和小肠组织中高峰度表达,在其余7种组织中未检测到信号。本研究获得了效价较高并能与内源性L-FABP蛋白发生免疫反应的抗血清。用此抗血清分析了鸡L-FABP的组织表达特性,结果表明该基因在肝脏和小肠组织中有较高峰度的表达。