鸭肠炎病毒UL6基因B细胞抗原表位预测、主要抗原域蛋白原核及其抗体制备

摘要

采用软件DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对本实验室所发现的鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）CHv毒株UL6基因（GenBank登录号EF055890）的氨基酸序列进行B细胞表位预测，分析结果显示UL6蛋白羧基端第Thr507-Gln515、Thr521-Met529、Asp531-Phe539、Gly544-Asn562、Thr568-Gln585、Lys592-Val604、Ala681-Ala778和Tyr780-Lys790区域内含有优势B细胞表位。以DEV CHv毒株基因组作为PCR反应模板，利用Oligo6.0软件设计一对引物，整体扩增涵盖上述具有优势表位的基因片段(1483-2385bp)，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a（+），获得表达载体pET-32a-UL6M后将其转化至E.col Rosetta（DE3），经IPTG诱导外源基因获得良好表达。以兔抗DEV多克隆血清进行Western blotting，检测显示抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应，表明该氨基酸片段可能含有软件预测的线性表位区。利用表达蛋白免疫家兔，制备抗血清，并进行HighQ阴离子交换法纯化获得抗体，为下一步利用该抗体建立检测方法奠定基础。