微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15／60基因的克隆及表达

摘要

提取微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)鼠基因型卵囊总RNA，RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD 18-T载体中，进行测序和同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显不，克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列比较，同源性为98．66％，氨基酸序列同源性为98．65％。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达后的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57．5％，纯化所得的重组蛋白纯度达95．2％。重组蛋白可被微小隐孢子虫感染兔血清特异性识别，用重组蛋白三免后，兔血清特异性抗体达到较高水平，表明该重组蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。对发展免疫诊断和免疫预防技术有重要价值。