果子狸源呼肠孤病毒的分离鉴定

摘要

在广东省采集的果子狸样品共192份，处理后接种Vero-E6细胞，从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变，表现为细胞内颗粒增多，细胞收缩、变圆，最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现，病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，呈正二十面体对称，具有呼肠孤病毒的形态特征，将病毒命名为Masked Palm Civet/China/2004(MPC/04)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞，不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞，这与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的红细胞凝集谱相符。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力；能耐受pH3.0的酸性环境；50℃水浴1h病毒未丧失感染能力；1mol/LMgCl2能提高病毒对热的抵抗力。为了进一步从分子水平上证实该病毒是呼肠孤病毒，用哺乳动物呼肠孤病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)，扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBIBLAST比较，选取同源性较高者进行序列同源性分析，发现该片段与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型参考毒株核苷酸同源性最高。以上结果证明该病毒为呼肠孤病毒科的成员。