表达H7亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒的构建及其免疫效力评估

摘要

本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上，把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点，然后切下同时含有HA和LacZ基因的片段再克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotⅠ位点，构建出禽痘病毒转移载体pSY681-HA7-LacZ，将此重组质粒与亲本禽痘病毒S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞，通过加入X-gal进行数轮重组病毒的筛选、纯化，获得一株重组病毒rFPV-H7HB，PCR和Western blot鉴定结果表明重组鸡痘病毒可以稳定表达HA蛋白。分别用106PFU、104PFU、102PFU剂量的重组病毒rFPV-H7HB经翅膀刺种途径接种免疫4周龄SPF鸡，免疫3周后分别用100LD50的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)鼻腔途径进行攻击。结果，不同剂量的重组病毒免疫后均可诱导出较高水平的HI抗体，并可完全抵抗H7N1毒株的致死性攻击，而非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明，稳定高效表达我国H7亚型禽流感分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)HA基因的重组禽痘病毒rFPV-H7HB可为我国H7亚型高致病性禽流感的防制提供必要和有效的物质技术储备。