猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

摘要

用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组，将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基，在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标，拯救出带有分子标记的克隆病毒，命名为recPCV1/G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)在病毒感染细胞中检出病毒抗原，其抗原性仅与PCV1/Cap蛋白单价特异性抗体发生反应，而与抗PCV2/Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalⅠ酶切位点，可用PCR结合限制性片断长度多态性分析法(PCR-RFLP)与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代，体外培养增殖性能稳定，病毒滴度达104.8TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆，为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。