猪圆环病毒2型Cap蛋白与白细胞介素-2重组腺病毒的构建与鉴

摘要

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原，含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2，分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)，其中Cap含有病毒主要抗原表位，是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-2是重要的细胞因子佐剂，能够增强疫苗的免疫效果。本研究利用PCR技术将PCV2 Cap蛋白基因和IL-2-Cap串联基因分别克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV)，与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞，经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-Cap和rAd-IL-2-Cap。测定其TCID50为1010.6/mL，1010.2/mL。利用RT-PCR、IFA、间接ELISA、Wester blot等方法以及IL-2ELISA试剂盒分别检测猪圆环病毒2型Cap蛋白和IL-2的体外表达情况，结果证明了两基因在腺病毒中获得了表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。