猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建

摘要

为构建猪捷申病毒(PTV)感染性克隆，进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究，根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列，设计并合成了4对特异性引物，PCR扩增并克隆覆盖PTV swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反复拼接和测序，最终将PTV全长cDNA定向克隆到pBluescriptSK(+)中。PCR、双酶切及测序鉴定证明PTV全长cDNA克隆构建成功。与Swine/CH/IMH/03亲本株及NCBI登录的其他PTV毒株序列比对发现，该克隆只有3个位点存在核苷酸及氨基酸突变，分别位于2A、2C及3D中。