传染性法氏囊病病毒血清2型23/82株VP5蛋白的原核表达及多克隆血清的制备

摘要

本实验构建传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清2型23/82株非结构蛋白vp5基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中进行了有效表达，并制备多克隆血清。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双切PUC57-23/82VP5质粒，获得23/82株vp5基因片段，连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a，经酶切鉴定获得重组质粒pET28a-23/82-VP5，转化到宿主BL21(DE3)，在IPTG诱导下成功表达融合蛋白，SDS-PAGE和Westernblot表明目的蛋白获得表达，分子量大小为23kDa。利用Ni-NTA柱纯化，复性后免疫8周龄BALB/c小鼠，3次免疫后采血，间接ELISA检测血清抗体效价为1:1×105；Western blot分析能够与纯化蛋白发生特异性反应，具有良好的免疫原性。23/82株VP5蛋白的表达和多克隆血清的制备为研究不同血清型VP5蛋白在致病性中的差异提供有力工具，同时为深入研究VP5蛋白的结构和功能奠定基础。