龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶动力学常数的影响

摘要

目的：探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法：MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌三种肿瘤细胞株的细胞毒作用,高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法.以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程.计算Km和Vmax.结果：MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为2.37x10-3±8.37×10-5 mM,9.16×10-4±7.54×10-5 nmol·106 cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为2.22×10-3±9.05×10-5 mM和5.14×10-4±3.72×10-5 nmol·106 cells-1.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为8.95×10-3±2.61×10-4 mM,2.55×10-6±1.92×10-8 nmol·min-1mgprotein-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为9.48×10-3±3.63×10-4 mM和2.43×10-6±1.32×10-8 nmol·min-1 mg protein-1,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p<0.01,细胞质p<0.05).结论：龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.