HPLC-MS/MS方法研究尿液中修饰的核苷及其碎裂差异

摘要

甲基化修饰的核苷是核酸的微量成分,在核酸中广泛存在,并与核酸的功能具有重要的关系.近年来,甲基化核苷成为人类疾病的潜在生物标志物.本课题中,利用固相萃取(SPE)柱作为前处理,并建立了高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-MS/MS)的SRM定量测定方法,分析了尿液中的六个甲基化核苷(N3-甲基胞苷,N1-甲基腺苷,N6-甲基腺苷,N2-甲基鸟苷,N1-甲基鸟苷和N2,N2-二甲基鸟苷).通过对比非冠心病人与冠心病人的尿液核苷分布,发现其中一种甲基化核苷m6A在正常人尿液中的含量显著高于冠心病人.基于MSn的数据，还分析了各种碎片碎裂的合理机理。在这个实验基础上，发现核糖的中性丢失是几乎所有常见核苷的主要裂解途径，于是建立了基于中性丢失的核苷定性测定方法，并在人体尿液中发现了几种未报道过的修饰核苷。