抗类风湿性关节炎胞外多糖依博素生物合成基因StelO的功能研究

摘要

目的：研究stel0基因在依博素生物合成中的功能,并获得具有生物活性的依博素衍生物.方法：stel0基因在大肠杆菌克隆、表达并对表达产物进行酶学性质研究;对stelO基因进行阻断和互补实验,并对stel0基因缺失突变株和基因互补株产生的多糖衍生物进行单糖组分变化及生物活性分析.结果：Stel0能够催化天冬氨酸生成天冬酰胺,该酶的Km值为0.9mM、最适温度为37℃、最适pH为8.0.stelO基因缺失突变株产生的多糖衍生物EPS—m与依博素相比,单糖含量有一定变化,IL-1R的拮抗活性显著降低;基因互补株产生的.EPS-c与EPS-m相比,单糖含量变化变化不大,但对IL-1R的拮抗活性显著恢复,在浓度为4.5(g/ml时甚至高于依博素.结论：stel0编码天冬酰胺合成酶,作为一个修饰基因参与依博素的生物合成;EPS-c可作为一个新依博素衍生物进一步研究.