淫羊藿甙对MCF-7细胞侵袭转移的影响及机制

摘要

目的：淫羊藿（ICA）是小檗科多年生草本植物，别名仙灵脾，是具补肾壮阳，祛风除湿功效的特色传统中草药。本实验中着重观察ICA对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭转移能力的影响，研究在这一过程中ICA对血管扩张刺激磷蛋白(Vasodilator-stimulated phosphoprotein，VASP) 表达水平以及Rac1活性的影响，并进一步探讨Rac1活性与VASP表达之间的关系。rn 方法：体外培养乳腺癌细胞系MCF-7：rn （1) 培养基中加入不同浓度ICA（0，10，25，50，100μg/ml) 或多西紫杉醇(docetaxel)（0.05μg/ml)作为阳性对照，24 h后用细胞侵袭实验和损伤修复实验分别观察不同处理组中MCF-7细胞的侵袭和迁移能力的差别；rn （2) 培养基中加(或不加)入ICA（50μg/ml) 处理24 h后用(或不用) EGF（15 ng/ml) 刺激15 min，Western blotting和RT-PCR分别检测各组细胞中 Rac1和VASP在蛋白和mRNA两个表达水平的差异，并用GST pull-down试验检测各组细胞Rac1活性的差异。rn （3）将Rac1-siRNA片段经脂质体转染至MCF-7 细胞内，24小时后，Western blotting和RT-PCR分别检测细胞Rac1和VASP表达水平的变化。rn 结果：rn （1) ICA对MCF-7 细胞的侵袭迁移能力均有明显的抑制作用，并且随浓度增加抑制作用逐渐增强，浓度为50μg/ml的ICA对细胞侵袭转移的抑制作用与阳性对照多西紫杉醇(docetaxel)（0.05μg/ml)作用相当（P）0.05）；rn （2) EGF（15 ng/ml) 单独处理15 min后细胞内Rac1活性和VASP表达量较空白组明显升高（P＜0.05），ICA（50μg/ml) 单独处理24 h后细胞内Rac1活性和VASP表达量较空白组明显降低（P＜0.05），ICA（50μg/ml) 处理24 h后用(或不用) EGF（15 ng/ml) 刺激15 min，细胞内Rac1活性和VASP表达量与空白组无明显差异（P）0.05）。rn （3）Rac1-siRNA转染组细胞中Rac1，VASP的mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。rn 结论：ICA 可以有效抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭转移能力，这种抑制作用是通过降低细胞内Rac1的活性，进而减少VASP表达而实现的。