香加皮杠柳苷及STAT3 siRNA诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的实验研究

摘要

目的：STAT3(Signal transducers and activators oftranscription 3，STAT3)信号途径己被确认是多种人类肿瘤干预治疗的有效分子靶标。香加皮杠柳苷(Periplocin ofCortex Periplocae，CPP)是本实验室与华药合作研究工作中发现的具有抗肿瘤作用天然抗肿瘤活性成分。本研究探讨该成份对癌细胞内STAT3信号通路的影响，为阐明杠柳苷的抗肿瘤作用机制和香加皮的二次开发奠定理论基础。本研究还将探讨CPP联合RNA干扰(RNA interference，RNA)的抗肿瘤效果和作用机理，为肿瘤临床治疗提供新的资料。rn 方法：应用Western blot、流式细胞术分析SMMC7721细胞中STAT3的表达及酪氨酸磷酸化情况；构建针对STAT3基因的三个特异性siRNA重组质粒及无关序列重组质粒HK—shRNA，应用Western blot、RT-PCR方法筛选最有效抑制STAT3表达的质粒表达载体用于后续实验；以CPP和/或STAT3 siRNA处理SMMC7721细胞，MTT法、流式细胞术、透射电镜进行CPP及STAT3 siRNA诱导SMMC7721细胞凋亡的研究；rn 应用Western blot、RT-PCR检测CPP及STAT3 siRNA对SMMC7721细胞STAT3信号通路相关分子的影响；rn 观察CPP和/或STAT3 siRNA对SMMC7721细胞荷瘤裸鼠抑瘤作用，流式细胞术检测CPP及RNAi对肿瘤细胞周期和凋亡的影响，Western blot及免疫组化分析JAKl一STAT3信号通路中JAK1、P-JAK1、STAT3、P-TAT3的表达变化，免疫细胞化学法分析CD34表达的变化。