一种新型固相核酸分子杂交方法的建立

摘要

目的：①建立一种新型固相核酸杂交分子方法：纸层析杂交方法。②分析自行组装的枝状DNA(bDNA)分子的信号放大作用。rn 方法：①以HCV RNA阳性血清为模板,制备质粒DNA,作为本实验的检测标本。②以硝酸纤维素膜为固相载体,建立传统的斑点杂交检测方法和新型的纸层析杂交方法,并对两种方法的检测性能进行比较。③自行组装枝状DNA(bDNA)信号放大分子,并将其应用于纸层析杂交方法。rn 结果：①纸层析杂交方法具有与斑点杂交方法相近的灵敏度,均为132ng/ul DNA,并且纸层析杂交方法的检测时间仅为2-3h,是斑点杂交方法所用时间的1/6。②自行组装的枝状DNA(bDNA)分子以5％非变性聚丙烯酰胺凝胶银氨染色显示其大约为500bps。③自行组装的枝状DNA(bDNA)分子应用于纸层析杂交使检测灵敏度提高20倍。rn 结论：①纸层析杂交方法与斑点杂交方法相比,具有操作简便、迅速、灵敏的特点。②自行组装的枝状DNA(bDNA)分子有明显的信号放大作用。