键合磷酸锆开管毛细管柱制备及富集磷酸肽方法研究

摘要

本文笔者开展了一种磷酸肽富集和质谱分析的新方法，并将其应用于复杂样品的分析中。本方法为一种利用键合磷酸锆开管毛细管柱的制备及用于快速富集磷酸肽的新方法。通过酸碱活化熔融石英毛细管内表面，使其带有自由的硅羟基，然后对硅羟基进行氨基修饰、磷酸基团修饰并与锆离子生成磷酸盐，最终合成具有特异性吸附磷酸肽分子的开管毛细管柱。另外，还考察了显著影响MAIDI源质谱灵敏度的常用试剂尿素、SDS和氯化钠对富集效果的影响。并用合成的磷酸肽段(FLpTEYVATR)与iTRAQ试剂相结合，对开管柱的富集效率、负载量和回收率等进行考察，确定负载量32.52 pmol，回收率78.1%(150cm X 50μm)。该功能化的开管毛细管柱性能稳定。利用α酪蛋白与SSA混合酶切溶液，考察了功能化毛细管开管柱的选择性以及对MALDI TOF MS检测灵敏度的影响，结果表明此方法对磷酸肽有较高的选择性，最低富集浓度可达到10(-8)mo1·L-1。最后，通过将所建富集和质谱鉴定方法用于牛奶样本中磷酸化蛋白质的富集和分析，结果表明，此功能化的开管毛细管柱可以用于复杂样本中磷酸化肽的富集，并提高其质谱鉴定效率。