不同毒力表型EV71 VP1氨基酸变异的研究

摘要

目的：前期从临床患者分离得到6株肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71),4株接种小鼠后致使动物后肢麻痹并死亡(重株),2株接种后仅引起轻微症状最终痊愈(轻株),测序显示两组病毒编码区内存在8处氨基酸的变异.本实验选取位于VP1上的变异位点(P639 S/G),构建突变体拯救病毒,比较病毒突变前后在细胞上的复制差异.rn 方法：利用反向遗传学手段,在EV71感染性全长cDNA的基础上构建突变体病毒的全长感染性cDNA,转染获得拯救病毒并传代验证;病毒全基因测序、RT-PCR、蛋白免疫印迹、免疫荧光检测拯救病毒;绘制拯救病毒的生长曲线.rn 结果：RT-PCR检测到EV71 VP1特异性核酸片段;蛋白免疫印迹、免疫荧光检测到EV71特异蛋白;突变前后拯救病毒的生长曲线没有发生明显改变.rn 结论：突变体病毒拯救成功且能稳定传代;EV71-P639变异不影响病毒的复制.