通心络对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞分泌ET-1与eNOS干预机制研究

摘要

目的：观察p38 MAPK信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达内皮素-1(ET-1)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)中的作用及通心络干预影响.方法：分别采用放免法及ELISA法测定不同浓度TNF-α(0、2.5、5、10、15、20 ng/ml)在不同时间点(0、1、2、4、8、12、24h)干预后HUVEC培养上清液中ET-1和eNOS含量；分别采用Western blot和Real time RT-PCR方法检测TNF-α干预24h后HUVEC中ET-1、eNOS蛋白及mRNA表达；采用Western blot方法检测TNF-α干预10 min、30 min、60 min后HUVEC磷酸化p38 MAPK蛋白表达.结果：不同浓度TNF-α随时间延长均明显增加HUVEC培养上清液中ET-1含量,降低eNOS含量；TNF-α显著升高细胞中ET-1蛋白及mRNA水平、降低eNOS蛋白及mRNA水平,在各时间点均可显著升高细胞p-p38MAPK蛋白表达.通心络可显著降低TNF-α诱导的HUVEC培养上清ET-1含量、降低细胞中ET-1蛋白及mRNA的异常升高；显著增加HUVEC培养上清中eNOS的表达、增加细胞中eNOS蛋白及mRNA的表达；明显抑制TNF-α诱导的细胞p-p38 MAPK表达.结论：p38 MAPK信号通路参与了TNF-α诱导HUECV细胞分泌ET-1和eNOS,通心络对内皮细胞保护作用机制与抑制该通路有关.