结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-HspX亚单位疫苗免疫特性及其保护效应研究

摘要

目的：为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答，本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190-198位的氨基酸多肽(CD8+T细胞表位)及Ag85B，构建融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-HspX(AMH)，并对其免疫原性及保护效应进行研究。rn 方法：PCR分别扩增Ag85B、Mpt64190_198-HspX基因，并依次插入pE128质粒中，在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸(DDA+BCG-PSN)混合构建亚单位疫苗，分别于1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠三次，最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应;最后一次免疫12周后尾静脉攻毒，6周后取肺、脾，部分经细菌培养进行菌落计数，部分固定切片后经HE及抗酸染色进行组织学观察。rn 结果：该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达，经Ni-NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白;AMH亚单位疫苗免疫小鼠脾细胞受到特定抗原(HspX、Mpt64190-195和PPD)刺激后，产生分泌IFN-γ的淋巴细胞数明显高于单个抗原Ag85B免疫组和另一个融合蛋白AMM组;AMH免疫组所产生的特异性抗HspX IgG抗体水平也明显高于其他组，所产生的抗Ag85B抗体水平与AMM组相当，而高于Ag85B组和BCG组。AMM+AMH疫苗免疫小鼠肺组织菌落计数，结核结节面积及抗酸染色阳性度均较低。rn 结论：AMH融合蛋白疫苗能诱导特异性的细胞免疫和体液免疫应答，具有较强的免疫原性。AMH和AMM疫苗联合免疫，可增强疫苗保护效应。