IPCs微囊化和体外生长分泌功能的研究

摘要

目的：研究胰岛素产生细胞IPCs微囊化和体外生长分泌功能规律，探索其作为胰岛B细胞替代物的新资源。rn 方法：取小鼠股骨和胫骨，冲出骨髓，以2×106/ml接种到25cm2培养瓶内，于37℃、5％C02培养箱中培养。传至三四代，用50μg/ml大鼠胰腺提取物诱导分化为IPCs。收集诱导后的IPCs使其悬浮于1.5％海藻酸钠溶液中，细胞密度为1.0～2.0x109L-1，通过气体微囊发生器，调节气体的流速分别为3L/min，5 L/min,7L/min,选择最佳气体流速，喷入100mmol/L CaCl2溶液中，以形成海藻酸钠钙珠，生理盐水洗3次，然后用0.05％多聚赖氨酸包裹，生理盐水洗3次，再与0.14％的海藻酸钠反应，生理盐水洗3次，最后用55mmol/L柠檬酸钠处理，获得微囊化IPCs。将微囊化IPCs放入六孔板中，每孔加入含15％FBS的IMDM培养液4ml，置37℃、5％C02、95％饱和湿度的培养箱中培养。用放射免疫法检测微囊化IPCs分泌能力，采用6-羧基乙二酸荧光素(6-Carboxyflucrescein diacetate，6-CFDA)和碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色法测定微囊内细胞存活率。rn 结论：本研究制备的微囊化IPCs能在较长时间保持存活和分泌功能，为胰岛B细胞提供新的来源，可用于糖尿病的发病机理和治疗研究。