多重FQ-PCR方法同时检测不动杆菌及常见碳青霉烯酶基因

摘要

目的:建立多重FQ-PCR方法同时检测不动杆菌及常见碳青霉烯酶基因.rn 方法:针对不动杆菌特异基因及常见碳青霉烯酶基因设计引物,建立2组多重FQ-PCR方法结合熔解曲线法分析靶基因,并对方法进行评价.rn 结果:建立2组多重FQ-PCR方法,1组同时检测不动杆菌属recA基因、鲍曼不动杆菌16S-23S rRNA ITS基因、NDM基因,另1组同时检测OXA-23-l ike、OXA-24-1i ke、OXA-51-like、OXA-58-like基因.两组多重FQ-PCR方法均可特异扩增靶序列并呈现特异熔解峰,最低可检测靶基因10拷贝/反应,在检测靶基因10-106范图内相关系数0.98,批间、批内重复试验Ct值变异系数均小于5％.检测临床分离的400株耐碳青霉烯不动杆菌,利用普通PCR及基因测序为对照方法,检测结果均一致.粪便模拟标本中各类耐碳青霉烯不动杆菌的检测最低浓度均为102cfu/ml.rn 结论:本研究建立的2组多重FQ-PCR方法能同时检测不动杆菌及常见碳青霉烯酶基因,方法特异性好、灵敏度高、线性关系好、成本低,在医院泛耐药不动杆菌的监测和防控方面具有广阔的应用前景.