山羊转人乳铁蛋白基因成纤维细胞和乳腺上皮细胞单克隆的制备及扩大培养

摘要

为了探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系，本研究将转染人乳铁蛋白(Humanlactoferrin，hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(fetal fibroblasts，FF)和乳腺上皮细胞(mammary gland epithelial，MGE)细胞进行克隆。在96孔板中，首先用3种浓度(v/v：0％、50％和100％)的适应条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备，进而把转染细胞单克降与非转染细胞共培养进行扩大培养，neo基因被用于筛选基因，以PCR鉴定转染细胞基因组DNA。结果：(1)100％适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率(FF：21.43％vs.3.70％;MGE：13.64％vs.0.00％);(2)转染细胞单克隆与非转染细胞共培养，显著提高了转染细胞单克降扩大培养后的比率(FF：53.33％　vs.10.00％;MGE：33.33％ vs.6.67％)，且明显缩短了扩大培养汇合时间(约20 d);(3)PCR鉴定结果表明，上述方法获得的克降细胞整合有hLF目的基因。rn 本研究结果可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断挺供了一种可靠的方法，并能节省转基因动物生产的费用及时间。