枯草芽孢杆菌B75菌株抗菌物质的提取与初步检测

摘要

本文采用浓盐酸、40％饱和度的硫酸铵沉淀枯草芽孢杆菌B75菌株无菌发酵液中的抗菌物质,以磷酸缓冲液(50mmol/L,pH值6.8)、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯8种溶剂提取菌体抗菌物质,利用平板管碟法检测活性,并对抗菌物质进行HPLC初步分析.结果表明,浓盐酸、40％饱和度的硫酸铵可完全沉淀无菌发酵液中的抗菌物质,浓盐酸沉淀溶解液的抑菌圈直径为(20.7±0.8) mm,硫酸铵沉淀溶解液为(24.3±1.1) mm；磷酸缓冲液、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯提取物无抑菌活性,甲醇、乙醇、乙腈、丙酮提取物有明显的抑菌作用,抑菌圈直径10.4～ll.6mm,显著低于浓盐酸、硫酸铵沉淀物.无菌发酵液、菌体中抗菌物质的HPLC初步分析发现,在同一色谱条件下,活性峰出峰时间差异较大,硫酸铵提取的为37.03min,浓盐酸提取的为35.56min,甲醇、乙醇、乙腈、丙酮4种溶剂提取的为30.49min.这说明存在于无菌发酵液与菌体中的抗菌物质明显不同.