琯溪蜜柚汁胞BETA-TUBULIN CDNA的克隆及原核表达

摘要

本研究以珀溪蜜柚汁胞为材料，运用cDNA克隆的方法，克隆得到了琯溪蜜柚果肉过氧化物酶的cDNA的全长，并对得到的序列进行了一些分析，从分子生物学角度对粒化的研究做了初步的探索。结果表明：琯溪蜜柚果肉Beta-tubulin cDNA全长1636bp，有完整的阅读框，编码444个氨基酸。另外5非翻译区60bp，3非翻译区243bp(不包含终止密码子TAA)，其中包括一个多聚腺苷酸化信号AATAAA，以及一个含21个腺苷酸的poly(A)尾。由琯溪蜜柚果肉Beta-tubulin cDNA推导的氨基酸序列与陆地棉(Gossypium hirsutum)、大豆(Glycine max)、杨属植物(Populus)等f司源性较高，分别为：86％，85％，84％等。通过构建重纽质粒p28-PTu，转化至TransRosetta(DE3)中，当诱导温度为37℃，IPTG浓度为1mm，诱导时间为4h时，其在大肠杆菌宿主中获得了表达。