Ad—ING4—IRES—IL—24双基因共表达载体构建及表达

摘要

构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素—24(IL—24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad—ING4—IRES—IL—24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响。将PCR扩增的IRES、ING4和IL一24基因片段分别插入pAdTrack—CMV载体中构建pAdTrack—CMV—ING4—IRES—IL—24双基因共表达重组转移载体。按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy—1—pAdTrack—CMV—ING4—IRES—IL—24,并在QBI—293A包装细胞中进行包装和扩增。RT—PCR法鉴定ING4和IL—24基因在QBI—293A细胞和A549肺癌细胞中的转录,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和增效作用。DNA测序结果显示pAdTrack—CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL—24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad—ING4—IRES—IL—24能成功介导ING4和IL—24基因在QBI—293A和A549细胞中转录,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad—ING4—IRES和Ad—IRES—IL—24单基因组相比,具有抑癌增效作用。