基于PCA策略构建醛脱氢酶表达载体

摘要

途径工程(Pathway engineering)经常涉及多酶催化,需将多个酶基因克隆至同一载体进行共表达.目前大多数载体构建仍延用传统的"酶切-连接"策略,操作步骤多,需要多种酶和载体,克隆多基因时耗时长,克隆大片段时又难于连接.PCA 策略可提高载体构建效率,该方法依赖DNA 聚合酶而不是连接酶.设计的20 bp 引物跨越目的基因两端及其相邻的载体骨架,通过重叠PCR 可将目的基因和载体骨架连接成环状分子.基于PCA 策略,本研究成功地将醛脱氢酶基因整合至表达载体pET28a,不仅为生物合成C3 平台化合物3-羟基丙酸奠定了基础,而且探索了一种新的载体构建方法.