乳糖诱导蔗糖磷酸化酶基因在重组大肠杆菌中的表达

摘要

以肠膜明串珠菌基因组DNA为模板,通过PCR 扩增得到1581bp的蔗糖磷酸化酶(SPase)DNA 片段.将该基因克隆到表达载体pET22b(+)上,构建获得重组质粒pET-SPase.将pET?SPase 转化到Escherichiacoli Rosetta(DE3)感受态中,IPTG 诱导表达后进行SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约为55 kD,与预期大小一致,结果表明SPase 基因在大肠杆菌中进行了表达.摇瓶培养试验表明IPTG、乳糖及乳清粉的诱导效果相似,都可以有效的诱导SPase的表达,而乳清粉不仅可以诱导蛋白表达同时作为碳源促进菌体生长.当加入20g/L 乳清粉并添加5g/L 甘油时,蔗糖磷酸化酶的酶活最大,为37U/mL.在5L 发酵罐的放大培养中,通过流加乳清粉、甘油和微量元素的混合物补料,生物量达到OD600=32,SPase 酶活为5600U/L.