绵羊Klf4编码区的克隆、序列分析与原核表达

摘要

参照GenBank上牛和猪的Klf4cDNA序列设计特异引物，采用RT-PCR方法从怀孕60d的胎绵羊皮肤总RNA中扩增绵羊Klf4基因编码区序列，利用生物学软件对其进行序列分析;将该编码区连接到原核表达载体pET-30b(+)上并转化BL21大肠杆菌，在IPTG诱导下进行表达。经测序，绵羊Klf4基因编码区序列包括终止密码子在内的1434bp，编码477个氨基酸，己在GenBank上登录(登录号GQ280389)，与牛、猪、马、人、猕猴、黑猩猩、鼠等物种相比，绵羊膏，Klf4基因CDS区的核苷酸序列相应序列同源性分别为98.26％;、93.81％、93.24％、90.24％、90.13％、90.37％和87.25％，其氨基酸序列同源性分别为97.94％、96.02％、94.14％、93.51％、92.08％和92.66％;生物软件分析显示，绵羊Klf4含有细胞核定位模体和锌指结构域。利用克隆获得的绵羊Klf4cDNA所构建的表达载体pET-30-Klf4,经IPTG诱导在BL21大肠杆菌中成功表达分子量约为57kD的融合蛋白His-Klf4。