J亚群禽白血病病毒中国分离毒SD9902株env-gp85基因的克隆及表达

摘要

将J亚群禽白血病病毒(ALV-J)急性转化型中国分离毒SD9902株的env-gp85基因的PCR产物克隆进表达性载体pGEX-5X-3中，构建成重组质粒pGEX-SD9902-gp85。将重组质粒pGEX-SD9902-sp85转化的BL21大肠杆菌培养并用IPTG诱导后，其菌体的超声波裂解物用SDS-PAGE电泳分离蛋白质，在经考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE凝胶中与非重组载体pGEX-5X-3的转化菌裂解物相比，重组质粒pGEX-SD9902-gp85的转化菌失去了相对分子质量为29 000的天然谷胱甘肽(GST)蛋白带，但出现1条相对分子质量为63 000的条带(相当于ALV-J囊膜gp85蛋白与GST的融合蛋白的相对分子质量)。在Western-blot中，ALV-J特异性单抗JE9仅能从重组质粒pGEX-SD9902-sp85的转化菌中特异性地识别出该63 000的蛋白条带，而与天然非重组载体pGEX-5X-3的转化菌不发生反应。而抗GST的抗体却从天然非重组载体pGEX-5X-3和重组质粒pGEX-SD9902-sp85的转化菌中分别识别出29 000或63 000的条带。Western-blot的结果证明，能分别被ALV-J特异性单抗JE9及GST特异性抗体识别的相对分子质量为63 000的蛋白质，确实为GST与ALV-Jgp85蛋白的融合蛋白。