SDF-1通过活化PKC-ζ趋化人表皮干细胞定向迁移的实验研究

摘要

目的：探讨信号蛋白PKC-ζ在间质细胞衍生因子1（Stromal-derived factor 1，SDF-1）趋化人表皮干细胞定向迁移中的作用及其机制。rn 方法：Ⅳ型胶原快速分选,无血清培养基(DK-SFM) 培养表皮干细胞，免疫组织化学染色观察表皮干细胞标志物β1整合素(β1 integrin）和角蛋白19(K19) 的表达；用transwell趋化小室观察SDF-1对Chelerythrine chloride(钙和DAG依赖性和非依赖性PKC亚型抑制剂)、Staurosporine(钙和DAG依赖性PKC亚型抑制剂)和PS-ζ（PKC-ζ特异性抑制剂）处理后人表皮干细胞的趋化作用；Western Blot方法检测SDF-1诱导后不同时段的人表皮干细胞PKC-ζ的磷酸化水平变化；采用Phalloidin-Rhodamine显示细胞骨架，激光共聚焦显微镜观察PKC-ζ抑制剂PS-ζ对人表皮干细胞极化的影响。rn 结果：分离培养出人表皮干细胞，免疫组织化学染色显示，细胞胞质中β1整合素及角蛋白Kl 9 均呈阳性表达。Chelerythrine chloride和PS-ζ能够抑制SDF-1趋化的表皮干细胞运动，而Staurosporine不能抑制SDF-1趋化的表皮干细胞运动；SDF-1能够引起表皮干细胞PKC-ζ的磷酸化水平增加；PS-ζ能够抑制SDF-1诱导的人表皮干细胞极化作用。rn 结论：信号蛋白PKC-ζ在SDF-1趋化的人表皮干细胞定向迁移中发挥重要作用。