铁皮石斛种子接菌共生萌发SSH文库的构建及荧光定量PCR对库中5个转录产物的验证

摘要

为研究铁皮石斛种子接菌共生萌发的分子机制，本实验采用抑制差减杂交(SSH)技术，分别以铁皮石斛接菌萌发5周(形态学观察进入种子萌发第3级阶段)和铁皮石斛未接菌培养5周(形态学观察仍处于种子萌发0级阶段，即未萌发)的种子互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为检测子(tester)与驱赶子(driver)，成功构建铁皮石斛种子接菌共生萌发相关基因的cDNA文库。对克隆产物测序，及blastX比对，并进行基因功能注释．其中有505个EST序列具有很高的植物同源性。对随机挑选的5个转录产物进行了荧光定量PCR检测。结果显示，在共生萌发的种子中表达量均有所提高，表明这些基因的表达对铁皮石斛种子接菌共生萌发可能起到了至关重要的作用，具有深入研究的价值，可为后续对铁皮石斛种子接菌共生萌发机理的研究奠定理论基础。