HO-1对原代培养大鼠AEC-Ⅱ细胞凋亡及Bcl-2、p53的影响

摘要

目的:探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对过氧化氢(hygrogenperoxide,H2O2)氧化损伤的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cell,AEC-Ⅱ)凋亡以及凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠,均予腹腔麻醉并取肺,分离纯化AEC-Ⅱ以1～2×106个/mL接种于培养板,原代培养24 h,将同批次AEC-Ⅱ细胞等量分为四组:正常组,H2O2组,HO-1组,抑制组(锌原卟啉Ⅸ)。采用H2O2(0.5 mmol/L)刺激AEC-Ⅱ,复制活性氧(Reactive oxygen species,ROS)攻击损伤AEC-Ⅱ细胞的体内情况,建立细胞氧化损伤模型;用HO-1(0.2 μmol/L)或锌原卟啉Ⅸ(20 μmol/L)于同时间处理给予保护或损伤。按照Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒操作,流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用Western blot法观察凋亡相关蛋白Bcl-2、p53的表达。结果: H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05),且随H2O2作用时间的延长细胞凋亡率增加;Bcl-2蛋白的表达减弱而p53蛋白的表达明显增强(P<0.05)。与H2O2组比较,HO-1组AEC-Ⅱ细胞凋亡率明显降低(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达明显增强、p53蛋白的表达减弱(P<0.05)。与HO-1组比较,抑制组细胞凋亡率增加(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达减弱而p53蛋白的表达明显增强(P<0.05)。结论:HO-1降低H2O2氧化损伤大鼠AEC-Ⅱ凋亡率,其调节相关凋亡蛋白Bcl-2、p53表达与其抗凋亡效应有关。