ApoE基因敲减载体构建及转基因大鼠模型的制备

摘要

目的：构建psuPER-shApoE 389#重组表达质粒,制备ApoE基因敲减大鼠模型,为进一步研究ApoE基因功能奠定基础。方法：设计并合成针对大鼠ApoE基因的RNAi干扰序列,构建pSUPER-shApoE重组质粒。应用原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源片段注射入sD大鼠受精卵中;将注射基因的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内,获得子代鼠。通过PcR方法检测仔鼠中shApoE的整合。结果：PCR扩增和测序结果均证实干扰片段成功插入pSuPER—GFP载体。显微注射1095枚受精卵,成活421(421/1095,38．44％),移植假孕大鼠14只,7只(7/14,50％)怀孕,共产仔33只,经鼠尾基因组PCR方法检测得到2只stApoE转基因阳性大鼠。结论：成功构建pSUPER-shApoE 389#质粒;通过显微注射法获得2只shApoE转基因阳性大鼠。