多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP-1)抑制剂筛选方法的建立及化合物筛选

摘要

近年来的研究发现，PARP-1作为一种重要的DNA损伤修复酶，在肿瘤细胞耐受化疗药物过程中起重要作用，抑制PARP-1活性能够明显增强抗肿瘤治疗的疗效，特别是针对BRCA基因缺陷的肿瘤患者疗效更为显著。本研究将带有PARP-1cDNA序列及6个组氨酸表达序列的pET32a蛋白表达质粒转化入HMS174plyS表达菌株，然后对诱导表达条件和纯化条件进行优化，再利用优化条件进行PARP-1的大量表达和纯化；然后利用NAD+化学定量法对酶活力、酶反应时间特性、酶活力与温度、pH的关系、酶活力与酶激活剂DNA浓度的关系进行研究，优化酶反应条件；最后利用纯化的PARP-1，在优化条件下对3-AB及本所600个新化合物的PARP-1活性抑制作用进行测定。