流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化

摘要

目的:优化流感病毒H1N1在MDCK细胞上的培养条件，高效扩增流感病毒。方法:对MDCK细胞培养流感病毒时添加的TPCK-Trypsin的浓度和培养基的种类进行了筛选;比较了不同细胞代次的MDCK对流感病毒的易感性;按MOI值0.001、0.01、0.1于MDCK细胞上接种H1N1，CPE>75％收获病毒上清，并按MOI值0.001接种H1N1后连续培养5天，分别于1、2、3、4、5天收获病毒上清，HA试验检测上清滴度，上清浓缩纯化后行TCID50检测，分别选取最佳的接种MOI值和收毒时间;最后对浓缩纯化病毒的红细胞吸附方法进行检验。结果:通过对比，TPCK-Trypsin的最佳作用浓度是0.25μg／ml，MEM为培养病毒的最佳培养介质;代次低的MDCK对流感病毒的易感性明显强于代次高的MDCK细胞;于MDCK细胞按MOI值0.001接种H1N1，且第3天收获的上清病毒滴度最高;红细胞吸附法能高效浓缩纯化流感病毒。结论:优化了在MDCK细胞上培养及纯化流感病毒的方法。