农杆菌介导

摘要： 为了探究火龙果溃疡病病原菌的致病机理,笔者利用农杆菌介导的遗传转化技术,分析了根癌农杆菌浓度、分生孢子萌发时间以及共培养温度等3个主要因素对遗传转化效率的影响,建立火龙果溃疡病菌的遗传转化技术体系,并对转化子进行筛选。结果表明,当农杆菌浓度OD_(600)=0.5、分生孢子萌发时间24 h、共培养温度25°C时遗传转化效率最高(833个转化子/10^(6)分生孢子);随机挑选200个转化子进行筛选,获得3株菌落形态与野生型菌株差异较大的转化子,4株产孢量减少的转化子,5株产孢量增加的转化子,6株致病力下降的转化子。

摘要： 为建立适宜MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,本试验在已知的紫花苜蓿再生体系的基础上,采用农杆菌介导法,以保定紫花苜蓿(MedicagosativaL.cv.Baoding)下胚轴和子叶为转化受体,将MsDUF基因导入到紫花苜蓿中,通过对愈伤诱导、分化及生根培养阶段抗生素浓度的筛选建立了优化的遗传转化体系,同时对筛选获得的转基因紫花苜蓿进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,农杆菌介导的MsDUF基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2d的紫花苜蓿下胚轴用含pCAMBIA1301-MsDUF质粒的农杆菌菌液(OD_(600)为0.3~0.5)侵染10min,共培养暗处理2d后转入含30mg/LHyg和500mg/LCef的愈伤诱导培养基和分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3cm高时转入含30mg/LHyg和300mg/LCef的生根培养基上,得到6株经PCR检测为阳性的抗性植株;选取5株进行RT-PCR检测,均检测出大小与目的条带相吻合的清晰条带,证明MsDUF基因已成功转入保定紫花苜蓿中。本试验成功建立了农杆菌介导的高效MsDUF基因转化紫花苜蓿的遗传转化体系,为进一步研究MsDUF基因功能奠定了基础,同时为紫花苜蓿育种和种质创新提供了基础材料。

摘要： 为研究在农杆菌介导的茶树遗传体系中,茶多酚对农杆菌侵染效率的影响,以LBA4404、EHA105、ATCC15834和K599 4个农杆菌菌株为研究对象,分析其在不同浓度茶多酚处理下的耐酚能力、被膜完整率、吸附性、vir和chv基因表达,以及遗传转化差异。结果显示,4个菌株的耐酚能力依次为LBA4404>K599>EHA105>ATCC15834,其中EHA105和ATCC15834菌株对茶多酚较为敏感;ATCC15834菌株被膜完整率与茶多酚的浓度、静置时间呈负相关,EHA105在600 mg·L^(-1)茶多酚处理48 h后,其被膜完整率最低;ATCC15834和EHA105对烟草叶肉细胞的吸附能力随着茶多酚浓度的升高而降低,在经茶多酚处理24 h后,ATCC15834中chv B和EHA105中chv B2的表达受到显著抑制,vir A表达量与低浓度酚类的敏感性呈正相关性;烟草经农杆菌菌液(含茶多酚)侵染后,瞬时转化效率和稳定转化效率均受到不同程度的抑制,发状根诱导率大大降低。1 000 mg·L^(-1)茶多酚处理后,ATCC15834的发根诱导率最低,仅为13.85%,坏死率高达33.85%。综上所述,茶多酚会降低农杆菌活力和被膜完整率,chv基因通过降低表达量影响其吸附性,最终导致烟草转化体系中瞬时转化效率和稳定转化效率均受到不同程度的抑制。

摘要： 为建立高效的黑果枸杞组织培养与遗传转化体系,本研究以黑果枸杞叶片、茎节、茎段为外植体,在含有不同浓度组合的NAA和BAP培养基上进行愈伤组织和不定芽诱导比较;选择黑果枸杞叶片为材料,采用农杆菌介导法,将带有绿色荧光蛋白基因(sGFP)的双元表达载体导入黑果枸杞,探讨侵染时间和抗生素浓度对遗传转化效果的影响。结果表明,黑果枸杞的最适植株再生体系为:以叶片为外植体,MS基本培养基中添加0.5 mg·L^(-1)NAA和0.3 mg·L^(-1)BAP,愈伤组织诱导率为88.56%,不定芽诱导率为54.54%,将不定芽置于1/2MS培养基中进行生根诱导,生根率为95%;稳定高效的遗传转化体系为:农杆菌侵染液OD_(600)为0.25,共培养3 d,卡那霉素(kanamycin)和羧苄西林(carbenicillin)浓度分别为25和250 mg·L^(-1)。愈伤组织和不定芽诱导时经卡那霉素和荧光标记双重选拔,愈伤组织阳性率为85.47%,出芽生根后经PCR鉴定,阳性转化率为29%;利用实时荧光定量PCR检测转基因植株,导入的外源sGFP基因均有较高的表达水平。本研究为利用基因工程技术对黑果枸杞进行品种改良提供了技术支撑。

摘要： [目的]为建立根癌农杆菌介导的莱茵衣藻快速简便高效的遗传转化体系,本研究以模式生物莱茵衣藻为受体材料,从转化方法和转化子快速鉴定两个方面进行了优化.[方法]比较了固体培养基共培养转化方法和液体培养基共培养转化方法对根癌农杆菌LBA 4404介导的莱茵衣藻CC425转化效率的影响;研究并比较了(1)首先经过TE裂解再进行PCR(两步法)和(2)不经TE裂解直接进行PCR(一步法)的两种转化子鉴定方法的最佳反应条件和扩增效率.[结果]农杆菌LBA 4404和莱茵衣藻CC425液体培养基共培养5 d后的转化效果最好,转化率达43.33±1.67个转化子/106个藻细胞.PCR最佳反应条件为:使用高保真DNA聚合酶Taq 1进行扩增;参加PCR反应的细胞密度为5×l03-5xl06个/mL;TE裂解缓冲液沸水浴20 min(两步直接PCR方法),或者预变性15 min(一步直接PCR方法).两步法直接PCR的扩增效率优于一步法,但后者反应步骤更简洁.[结论]本研究建立并优化了农杆菌液体介导莱茵衣藻遗传转化体系,该体系可快速获得遗传转化子,减少转化工作量.

摘要： [目的]建立籼稻'中恢161'Oryza sativa subsp.indica'Zhonghui 161'农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系.[方法]以籼稻'中恢161'的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L?1)进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验.利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入'中恢161'的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L?1草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选.抗性愈伤组织进一步分化、成苗.[结果]草甘膦质量浓度为300～400 mg·L?1时,愈伤组织褐化率约50％,具有很好的选择效果.经统计,300、350和400 mg·L?1草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16％、61.72％和84.04％,抗性愈伤组织的分化率为46.43％,成苗率为32.84％.共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18％.[结论]建立了'中恢161'农杆菌介导的转化体系.

摘要： 玉米是世界上三大粮食作物之一,目前,玉米产量和品质的提高较大程度依靠基因工程技术.而玉米的农杆菌转化是对玉米基因组进行遗传修饰的有效手段.综述了玉米农杆菌转化的受体、影响农杆菌转化效率的因素,以有效地提高转化效率.

摘要： 【目的】建立籼稻‘中恢161’Oryza sativa subsp.indica‘Zhonghui 161’农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系。【方法】以籼稻‘中恢161’的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L^(-1))进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验。利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入‘中恢161’的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L^(-1)草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选。抗性愈伤组织进一步分化、成苗。【结果】草甘膦质量浓度为300~400 mg·L^(-1)时,愈伤组织褐化率约50%,具有很好的选择效果。经统计,300、350和400 mg·L^(-1)草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16%、61.72%和84.04%,抗性愈伤组织的分化率为46.43%,成苗率为32.84%。共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18%。【结论】建立了‘中恢161’农杆菌介导的转化体系。

摘要： 为了培育优良的抗虫玉米自交系,通过农杆菌介导的方法,将含有自主改造合成的抗虫基因Cry1Ab-t的植物表达载体pCAMBIA3300m导入玉米杂交种HiII基因组中,通过双丙氨磷筛选、PCR检测获得阳性转基因植株,采用RT-PCR、试纸条、ELISA方法检测外源基因的表达情况,并进行抗虫性鉴定.结果表明,用双丙氨磷筛选后,获得了116株转基因玉米植株;经目的基因Cry1Ab-t和标记基因Bar的PCR检测,获得转基因阳性植株82株.选取长势好的转基因材料YA108进行RT-PCR、Bt-Cry1Ab/Ac试纸条和ELISA分析发现,转基因玉米YA108的Cry1Ab-t基因在转录、翻译水平上均表达.玉米花丝接虫试验表明,非转基因玉米花丝虫食严重,表现为高感玉米螟;而转基因玉米YA108花丝抗虫效果明显,均达到高抗水平,抗虫性表现稳定;吐丝期接虫试验表明,非转基因玉米接虫后期被咬食严重,茎秆多处有蛀孔,伤口处大多有霉菌,而转基因玉米YA108没有受到危害.田间接虫后,无论叶片和花丝,转Cry1Ab-t基因抗虫玉米材料YA108对亚洲玉米螟都具有非常好的抗性,能够短时间杀灭玉米螟幼虫,并极大程度减少了由于虫害引起的霉变.室内和田间接虫鉴定结果表明,转基因玉米YA108对亚洲玉米螟有较强的杀虫效果,田间抗虫等级为1级,抗性水平为高抗.

摘要： [目的]我国需要大量人工林来满足木材需求,而速生林的木材品质有待改良.研究木材形成的基因调控是材性改良的基础.为加速鉴定木材形成相关基因的研究,建立一种快速、便捷、高效的瞬时转化体系尤为重要.[方法]采用显微切片,观察1年生银腺杨84K休眠茎段水培下的形成层活动规律;以其作为瞬时转化受体,增强型绿色荧光蛋白(eYGFP)作为报告基因,构建表达载体,采用农杆菌介导真空渗透侵染方法进行84K茎段的瞬时转化.并通过L9(34)正交试验对农杆菌GV3101侵染浓度、真空渗透侵染时间、真空渗透侵染次数及侵染后培养时间进行优化.[结果]银腺杨84K 1年生枝条室温水培条件下可以解除休眠,形成层在水培15天左右活动已比较旺盛,并出现新分化的导管.培养约30天,木质部大量积累.这说明枝条经1个月时间可以完成形成层的分化、木质部的形成等木材形成的全过程.从形态上观察,形成层、木质部和韧皮部的生长发育过程与正常树木没有差异.采用农杆菌介导真空渗透侵染方法,茎段及切片在激发光下可在形成层区域观察到绿色荧光,说明茎段转化成功.进一步通过正交试验分析,表明4个转化条件对转化率的影响依次为:侵染后水培天数>真空渗透侵染时间>菌液浓度>真空渗透侵染次数.农杆菌介导真空渗透瞬时转化银腺杨84K茎段的最优组合是农杆菌重悬液浓度OD600为0.9、真空渗透侵染20 min、真空渗透侵染2次、侵染后水培15天.[结论]建立了农杆菌介导的银腺杨84K茎段真空渗透侵染瞬时转化体系.这一体系可快速鉴定参与维管组织分化相关基因的功能,有助于揭示木质部发育的调控机制.同时该方法也可为研究其他木本植物的木材形成相关基因提供借鉴.

摘要： 以陆地棉邯208为材料，进行茎尖分生组织再生培养，采用农杆菌介导转化外源基因，研究固化剂、植物生长调节剂和抗生素筛选对茎尖生根和成苗的作用，以及菌液浓度、侵染时间、共培养温度、共培养时间对转化率的影响。结果表明，以phytagel为固化剂，0.1mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 IAA最适于茎尖不定芽的诱导，1/2MSB+0.1mg·L-1 IAA + 0.1mg·L-1 NAA诱导生根效果最佳。在75mg·L-1 Kan筛选下，以OD600为0.9的农杆菌菌液侵染25 min，22°C共培养48h，外源基因的转化率最高。采用该转化体系将克隆的编码谷胱甘肽S-转移酶的抗黄萎病相关基因GhGST转化邯208，经PCR检测获得了转基因阳性植株。

摘要： 查尔酮还原酶是豆科植物中的一种参与异黄酮代谢的还原酶。它与查尔酮合酶共同催化香豆辅酶A，生成6-脱氧查尔酮。6-脱氧查尔酮作为异黄酮代谢的中间产物参与随后的生化反应。由于查尔酮还原酶是豆科植物中特有的一个还原酶，对于它的研究报道比较少，因此克隆查尔酮还原酶基因并研究其功能，有助于进一步了解大豆中异黄酮代谢过程。转基因植物是验证基因功能的基础，因此，本试验在克隆、通过生物信息学分析查尔酮还原酶的同时，还对农杆菌介导大豆子叶节转化体系进行了尝试，初步得到一些转基因大豆植株，并对如何优化该转化体系进行了分析。

摘要： 自Hinchee等首次采用农杆菌介导法获得大豆转基因植株之后,许多研究者对农杆菌介导法转化大豆的影响因素进行了探讨,如农杆菌菌株类型,抗生素、激素浓度及筛选剂的选择压力等。虽然大豆再生体系已经建立起来,但是农杆菌介导转化大豆子叶节的方法仍然存在稳定性差,转化效率低等问题。本文主要探讨大豆基因型,外植体的选择,农杆菌浓度,侵染时间,乙酰丁香酮浓度及超声波处理等因素对大豆转化效率的影响,试图建立稳定的农杆菌介导转化系统。本研究主要以大豆子叶节和茎尖作为外植体,采用GUS瞬时表达的方法,探究大豆遗传转化中的重要影响因素,以提高大豆的遗传转化效率。

摘要： 通过农杆菌介导转化,经过潮霉素的二次筛选,共获得约200个稳定遗传的转化子,转化效率为平均每106个分生孢子可得到150～200个转化子。对随机挑取的转化子进行PCR检测、荧光观察和Southern杂交检测结果表明T-DNA已经成功插入到炭疽病菌的基因组中。通过生物学特性分析,筛选到产孢量增强菌株2株(ZH12和ZH18),其中ZH18的产孢量达到107个/mL。此外,致病性测定结果表明,ZH2、ZH16、ZH18和ZH22这4个转化菌株的生防效果均比野生型高。经筛选得到产孢或致病性都提高的菌株,为进一步开发研究该菌成为工程菌和进行工业化生产打下基础。

摘要： 本文论述了获得转基因不结球白菜的转化和再生程序,通过对组织培养体系优化增加白菜再生频率.使用pCas9介导的不结球白菜基因编辑载体,含有除草剂抗性基因筛选的根癌土壤杆菌菌株GV3101与苏州青的下胚轴外植体共培养.在共培养的3个月内获得转化的植物,通过除草剂Bar基因抗性筛选,阳性植株PCR验证得到转基因植株,为不结球白菜通过基因工程进行遗传改良提供了良好的技术支持.

摘要： 以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为材料,通过农杆菌介导法将本实验室人工改造的Cry9HNt抗虫基因导入到了玉米基因组中,并对获得的转基因植株进行PCR鉴定,进而选取部分PCR呈阳性的植株进行Southern杂交,结果表明Cry9HNt基因已经整合到玉米基因组中.BT蛋白免疫试纸鉴定结果也进一步证实了目的蛋白的表达.对转基因T1代植株进行田间抗虫鉴定,结果表明转基因玉米植株的抗虫活性显著地优于非转基因对照,这也进一步证实了改造完成的Cry9 HNt基因具有良好的抗虫活性.

摘要： 本文采用分子生物学技术克隆出AT3G28300，并与GFP融合构建双元表达载体，再通过农杆菌介导法转化水稻植株，获得带有融合基因表达的转基因拟南芥株系。GFP荧光定位也证明了AT14A蛋白定位于细胞膜上。

摘要： 本文利用下胚轴侵染和花序浸染两种方法来将农杆菌介导的玉米C4型PEPC光合相关基因导入到甘蓝型油菜中，分析了其光合生理表现，为利用C4高光效基因提高油菜产量和品质进行了探讨。

摘要： 子叶外植体预培养3天(黑暗培养)后，6个菌液侵染处理中，用液体MS培养基稀释20倍的菌液浓度、浸泡时间15分钟处理效果最好;再生植株的筛选使用卡那霉素(Kan)，设置0、65、75、85、90(mg/L)五个浓度梯度。结果表明，西瓜转基因的筛选剂Kan浓度75 mg/L比较合适，外植体生长缓慢，无不定芽分化。抑菌筛选用抗生素头苞拉丁胶囊(医用，CB)进行，设50、100、150、200、250和300mg/L六个浓度，结果表明CB的最适浓度为300mg/L。获得了Kan筛选的完整植株，通过PCR鉴定，2株初步证明目的基因已成功转入西瓜基因组中。

摘要： 稻瘟病菌(Magnaporthe Oryzae)引起的稻瘟病是全球水稻生产上最重要的病害之一,其与水稻的互作系统已成为研究植物病原真菌与寄主互作的理想模式系统之一,该病菌也是研究丝状致病真菌生长发育及致病分子机制的重要模式生物。鉴定和分析稻瘟病菌的致病相关基因,对深入了解稻瘟病菌的致病分子机制具有重要的意义,同时为寻找新的药物靶标,设计合理有效的稻瘟病菌防治策略提供实验依据。DNA插入突变是标记、鉴定功能基因的有效途径之一。农杆菌介导的转化(ATMT)在丝状真菌遗传转化体系中具有效率高、成本低,操作方便和重复性好等多重优点。本研究采用ATMT方法构建稻瘟病菌突变体库,从中筛选到一个与致病,巨相关的基因MGG_06868(MoILVZ)。该基因编码一个乙酰乳酸合成酶(ALS)。在白色念珠菌中,编码乙酰乳酸合成酶的基因ILV2、ILV6均参与亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ⅱe)、缬氨酸(Val)三种氨基酸的合成过程.根据同源序列比对,在稻瘟病菌基因组数据库中搜索到另一个乙酰乳酸合成酶编码基因ILV6的同源基因,命名为MoILV6.为阐明ALS编码基因在稻瘟病菌的生物学功能,我们对MoILV2和MoILV6进行了深入的研究.根据同源重组原理、采用原生质体转化方法分别获得了其敲除突变体△Moiv2和△Moilv6.对突变体进行生物学性状分析发现,ΔMoilv2和ΔMoiv6突变体气生菌丝生长稀疏、菌落呈现黄色,但生长速率及生物量与野生型比较无显著性差异;两个突变体均不能产生分生孢子梗和分生孢子,qRT-PCR检测发现与分生孢子梗发育相关基因MoCOSl和MoCON2的转录水平在突变体中显著下调;两个基因缺失突变体均丧失了对水稻的致病能力,但菌丝尖端在诱导界面上仍能形成附着胞;此外.突变体的胞外漆酶和过氧化物酶活性降低,突变体内编码胞外漆酶和过氧化物酶的基因转录水平显著降低.进一步研究发现,基本培养基MM和产孢培养基SDC分别添加外源的Leu、Val、Ile三种氨基酸.MoILV2缺失突变体在生长早期能观察到非常少量的分生孢子;而MoILV6缺失突变体的产孢能力有所恢复,但产孢量仍显著低于野生型,且产生的分生孢子没有致病能力.研究还发现MoIlv2和MoIlv6定位于线粒体中.上述结果表明,乙酰乳酸合成酶MoIlv2和MoIlv6参与调控稻瘟病菌的生长发育、分生孢子梗及分生孢子的形成,同时,MoIlv2和MoIlv6通过参与调控Leu、VaI、Ile三种氨基酸的合成,从而调控无性繁殖和致病过程.

摘要： 本发明涉及一种玉米农杆菌转化受体的制备方法及农杆菌介导的玉米转化方法，属于玉米生物技术育种技术领域。本发明提供的玉米农杆菌转化受体的制备方法，包括以下步骤：1)将玉米幼胚进行诱导培养，得到疏松的II型愈伤组织；2)将步骤1)得到的疏松的II型愈伤组织进行酶解，得到感受态II型愈伤组织细胞，即玉米农杆菌转化受体；所述酶解用酶包括纤维素酶和果胶酶。本发明提供的转化受体选用感受态玉米II型愈伤组织，克服了玉米幼胚来源的季节限制，为建立稳定的玉米农杆菌转基因体系奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种建立农杆菌介导东农冬麦1号成熟胚遗传转化的方法，包括：挑选当年籽粒饱满的东农冬麦1号成熟种子，消毒，灭菌，清洗，无菌干燥后取胚，接种在诱导培养基中培养，再置于预培养培养基中进行预培养得到预培养愈伤组织；取农杆菌在YEP培养基划线培养；接着挑取培养得到的农杆菌单菌落接种在液体YEB培养基中培养至对数期，离心得到菌液；将菌液加入侵染培养基中重悬得到混合物料；将预培养愈伤组织浸入混合物料中侵染，无菌干燥，置于含有两层无菌滤纸的培养皿中进行共培养；再置于恢复培养基上进行恢复培养；接着置于分化筛选培养基上进行抗性筛选；再置于生根培养基中进行壮苗生根培养，炼苗，然后将植株移栽到花盆中培养。

摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的猕猴桃转化的方法，属于猕猴桃基因工程技术领域，其技术方案要点是：猕猴桃转化的方法包括下胚轴稳定转化和果实瞬时转化；下胚轴稳定转化的步骤如下：S1、猕猴桃种子播种；S2、下胚轴去顶保湿；S3、遗传转化载体构建；S4、农杆菌转化及侵染；S5、转基因植株鉴定；S6、稳定转化下胚轴体系建立；果实瞬时转化的步骤是：A.遗传转化载体构建；B.农杆菌转化；C.农杆菌菌液转入猕猴桃果实；D.瞬时转化果实体系建立。本发明主要用于建立稳定转化下胚轴体系和瞬时转化果实体系，利用该方法成功实现了稳定转化和果实瞬时转化，有效改变猕猴桃遗传转化再生率普遍低下的现状。

摘要： 本发明公开了一种建立农杆菌介导中国水仙高效遗传转化体系的方法，包括以下步骤：植物材料预处理、外植体消毒、愈伤组织诱导、侵染液制备、农杆菌侵染、共培养和筛选培养以及GUS染色检测。本发明以中国水仙子房为转化材料，通过农杆菌类型和愈伤组织预培养时间及卡那霉素浓度的优化，建立了中国水仙的高效遗传转化体系，且转化效率高，为中国水仙种植资源创制及品种改良奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，属于植物组织培养技术领域，其技术方案要点是，步骤如下：S1、切下除虫菊组培苗叶片，用菌液侵染叶片；S2、滤出叶片，接种于MS基本培养基中，暗培养2天；S3、将叶片移至固体培养基Ⅰ中培养20天，形成叶片根；S4、将叶片根的根尖切下，放置在固体培养基Ⅱ上，根尖朝上，培养7天，获毛状根；S5、选取不具向地性的毛状根，将毛状根的根尖切下放置在固体培养基Ⅲ上，培养20天，获抗性根；S6、选取抗性根，切成多段水平放置在固体培养基Ⅳ上，然后进行继代培养。本发明主要用于获得转基因除虫菊毛状根，建立了高效迅速的除虫菊毛状根转化体系，能够为除虫菊的科研及育种工作提供有效技术支撑。

摘要： 本发明提供一种根癌农杆菌介导的火木层孔菌的遗传转化方法，包括如下步骤：1)将火木层孔菌菌丝经溶壁酶液酶解、纯化得到火木层孔菌原生质体，2)以含有外源基因的重组根癌农杆菌对步骤1)中得到的火木层孔菌原生质体进行遗传转化处理，3)将处理后的火木层孔菌原生质体进行再生培养和抗性筛选培养，获得整合外源基因的火木层孔菌转化株。本发明方法能有效地介导外源基因整合入火木层孔菌基因组中，并使之得到稳定的复制和表达，从而建立了火木层孔菌的转化系统。本发明方法所建立的火木层孔菌转化系统，为火木层孔菌开辟了广阔的应用领域，将使火木层孔菌这一宝贵资源得到更充分的利用。

摘要： 本发明公开了一种植物高效启动子PAtGCS，该启动子的核苷酸序列是序列表1所示的核苷酸序列。研究表明将该启动子插入到pRdCas9载体中驱动Cas9基因表达，通过发根农杆菌介导的毛状根转化，在转基因毛状根中可以高效地进行基因编辑，两条染色体的基因位点同时发生突变比35S启动子驱动Cas9基因编辑载体的效率1.7‑8.3倍。

摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法，包括以下步骤：步骤1，配置诱导培养基；步骤2，选取外植体取授粉11‑16天的幼雌性穗，并对其进行消毒，消毒时采用酒精浸泡8‑12分钟，消毒完成后选取雌穗中部颗粒饱满大小在1.0‑1.6mm的幼胚；步骤3，将选取的幼胚接种到诱导培养基中，诱导愈伤组织，在黑暗环境培养2‑6天，温度保持在23‑28度之间；本发明所提出的农杆菌介导的高效玉米骨干自交系遗传转化的方法通过降低农杆菌介导转化玉米共培养的时间，可大大的提高玉米愈伤组织的出愈率，愈伤质量，以及愈伤组织的分化能力，并将出苗率提高到65％。

摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导白三叶愈伤组织遗传转化方法，所述包括如下步骤：(1)建立遗传转化受体；(2)制备农杆菌工程菌液；(3)侵染与共培养；(4)抗性愈伤组织筛选培养；(5)抗性愈伤组织分化诱导；(6)抗性芽生根诱导；(7)抗性植株分子鉴定。本发明提供的农杆菌介导遗传转化再生体系操作简单易行，愈伤组织的转化率较高，为白三叶的基因工程研究和分子育种提供材料，具有科研价值、经济价值和生态价值。

摘要： 本申请提供了一种农杆菌介导的芍药瞬时表达的方法，包括：将目标芍药幼苗完全浸没在预设转化液中，进行负压强度为10的处理，得到目标芍药组培苗和实生苗；在28°C黑暗条件下将所述目标芍药组培苗振荡侵染24h，芍药实生苗振荡侵染12h，得到侵染后的目标芍药组培苗和侵染后的芍药实生苗；将侵染后的目标芍药组培苗和侵染后的芍药实生苗分别接入固体共培养基和细沙中，在25°C黑暗条件下培养3天，得到培养后的目标芍药组培苗和实生苗；对培养后的目标芍药组培苗和实生苗进行GUS染色，完成目的基因的瞬时过量表达。不依赖于昂贵的实验器材，成本低；转化过程简单快捷，全程仅需4‑5天；转化率可达到93.3％，为芍药基因功能的分析提供有力技术支持。