H9c2心肌细胞

摘要： 研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对高糖诱导受损的大鼠心肌细胞(H9C2)的改善作用及其分子机制.采用高糖培养液建立高糖细胞损伤模型,检测了EGCG给药处理后对细胞活力、抗氧化酶活性SOD和GSH-Px、促炎因子TNF-α和IL-6水平、相关mRNA转录水平(NF-κB、IκBα和IL-1β).结果表明:与正常组相比,模型组心肌细胞活力显著下降、SOD和GSH-Px活性均显著降低,TNF-α和IL-6炎性因子水平显著增加,NF-κB、IκBα和IL-1βmRNA转录水平显著上调(P<0.01);与高糖组相比,EGCG预处理后可显著增加细胞活力水平,显著增加细胞SOD和GSH-Px活性,显著降低TNF-α和IL-6炎性因子水平,显著下调NF-κB、IκBα和IL-1βmRNA转录水平降(P<0.01).EGCG能够减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低细胞炎症反应,其机制可能与NF-κB炎症信号通路有关.

摘要： 目的:观察染氟H9c2心肌细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)mRNA表达的变化,探讨氟化钠(NaF)致心肌损伤的潜在机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,并加入不同剂量NaF进行染毒处理。设定NaF染毒剂量分别为10、20、40 mg/L三组,对照组不加NaF。应用CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色法在荧光倒置显微镜下观察细胞形态的变化及凋亡情况,以及通过实时荧光定量PCR技术检测p38MAPK mRNA表达水平。结果:与对照组相比,随着NaF浓度增加,H9c2心肌细胞活力下降(P<0.05);不同浓度NaF处理48 h后,细胞形态发生了不同程度的改变,且出现细胞凋亡(P<0.05);与对照组相比,随着NaF浓度的增加,p38MAPK mRNA表达水平逐渐增加(P<0.05)。结论:NaF可能通过诱导p38MAPK的表达,激活p38MAPK信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡,进而造成心肌细胞损伤。

摘要： 目的探讨类叶升麻苷调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)/核因子κB(NF-κB)通路对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞损伤的影响。方法本实验将H9c2心肌细胞分为对照组(不给药、不造模)、H/R组(仅造模)、H/R+AS-L组、H/R+AS-M组、H/R+AS-H组(以上3组先分别给予10、30、90μmol/L类叶升麻苷,再造模)、H/R+pcDNA组[先转染pcDNA(空载体),再造模]、H/R+pcDNA-Rnd3组[先转染pcDNA-Rnd3(Rnd3过表达载体)使Rnd3过表达,再造模]、H/R+AS-H+si-NC组[先转染si-NC(阴性对照),然后给予90μmol/L类叶升麻苷,再造模]、H/R+AS-H+si-Rnd3组[先转染si-Rnd3(Rnd3小分子干扰RNA)抑制Rnd3过表达,然后给予90μmol/L类叶升麻苷,再造模]。各组经相应处理后,检测细胞凋亡率和细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、白细胞介素1β(IL-1β)水平、IL-6水平、Rnd3和NF-κB亚基p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白的表达、活化胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)和Cleaved Caspase-9蛋白表达的变化。结果给予不同浓度类叶升麻苷均可降低H/R诱导H9c2心肌细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平、LDH释放量和MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,升高SOD活性和Rnd3 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),且呈剂量依赖性。Rnd3过表达可使H/R诱导H9c2心肌细胞凋亡率,NF-κB p65、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平,LDH释放量和MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,使Rnd3蛋白表达水平和SOD活性升高(P<0.05);而抑制Rnd3过表达,可减弱类叶升麻苷对H/R诱导H9c2心肌细胞的凋亡、氧化应激及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论类叶升麻苷可通过促进Rnd3表达、抑制NF-κB p65表达来调控Rnd3/NF-κB通路,进而抑制心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应,从而减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

摘要： 目的:从Nrf2–ARE信号通路探讨加味丹参饮对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护机制。方法:制备SD大鼠含药血清及空白血清,以不同浓度加味丹参饮含药血清干预正常及H/R损伤H9C2心肌细胞,用CCK–8法筛选加味丹参饮的实验剂量。体外培养H9C2心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,将H9C2心肌细胞随机分为6组:正常组、H/R组、空白血清组(BS组)、加味丹参饮含药血清组(JDD组)、JDD+Nrf2抑制剂组(JDD+ML385组)、活性氧(ROS)清除剂组(NAC组),比较各组心肌细胞间形态学变化的差别。结果:选择15%浓度的加味丹参饮含药血清为工作浓度血清。对比正常组,H/R组倒置显微镜下细胞变性坏死程度增加,JDD+ML385组、BS组与H/R组在细胞形态的表现上相似,而JDD组及NAC组干预后,H9C2心肌细胞的病理状态均有明显改善。结论:加味丹参饮抗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用可能通过活化Nrf2–ARE通路减轻活性氧(ROS)介导的氧化应激损伤来实现。

摘要： 目的探讨延胡索乙素(l-THP)对高糖诱导H9c2细胞凋亡和氧化应激抑制作用。方法以高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡为实验模型,将实验分为5组:对照组(Control)、模型组(Model)、l-THP高、中、低3个剂量组(100、50、25μmol/L);用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力,用试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧簇(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot印迹法检测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平;RT-PCR法检测Fas和FasL基因表达水平。结果与Control组相比,Model组H9c2细胞的活力明显降低,l-THP能逆转高糖对心肌H9c2细胞活力降低的作用,并呈浓度依赖性;与Control组相比,Model组H9c2细胞LDH的释放量和ROS的活性均明显增加,GSH-PX的活性显著下降,与Model组相比,l-THP可呈浓度依赖性降低LDH的释放量,降低ROS的活性,增强GSH-PX的活性;与Control组相比,Model组H9c2细胞凋亡率明显升高,Caspase-3的蛋白表达水平明显升高,Fas和FasL基因表达水平明显上升,与Model组相比,l-THP能降低H9c2细胞的凋亡率,降低Caspase-3的蛋白表达水平,下调Fas和FasL基因表达水平。结论l-THP通过调控细胞凋亡和抗氧化作用来保护H9c2细胞免受高糖诱导的损伤,以此提高其生存能力。

摘要： 目的 探究β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白B-1(Apbb1)基因对H9c2心肌细胞增殖的影响。方法 利用小干扰RNA与pcDNA3.1;质粒对H9c2心肌细胞系进行敲低与过表达Apbb1基因处理,通过CCK8实验、qPCR实验以及细胞免疫荧光实验检测细胞增殖情况,评价Apbb1基因对心肌细胞增殖的作用;利用在线数据库String分析APBB1蛋白的互作蛋白,探究其可能发挥作用的方式。实验分为4组:敲低对照组、敲低Apbb1组、过表达对照组和过表达Apbb1组。结果 相较于敲低对照组,敲低Apbb1组Apbb1基因表达下降52%(P<0.01,n=3),细胞增殖在48 h时下降44%(P<0.01,n=3),但是在72 h时细胞增殖增加86%(P<0.0001,n=3);细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别升高80%(P<0.0001,n=3)和76%(P<0.0001,n=3);细胞免疫荧光实验发现PH3与Aurora B阳性细胞分别增加4.33%(P<0.01,n=3)和4.67%(P<0.05,n=3)。相较于过表达对照组,过表达Apbb1组Apbb1基因表达上调119倍(P<0.001,n=3),细胞增殖在48 h与72 h分别降低1.23倍(P<0.0001,n=3)和1.04倍(P<0.0001,n=3);细胞增殖标志分子Ki67和细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别降低25%(P<0.01,n=3)、72%(P<0.001,n=3)和38%(P<0.001,n=3);PH3与Aurora B阳性细胞分别降低3.7%(P<0.01,n=3)和4.36%(P<0.05,n=3)。蛋白互作网络分析结果表明KAT5、APP与APLP2是APBB1互作最为显著的蛋白。结论 敲低Apbb1基因促进H9c2心肌细胞增殖,过表达Apbb1基因抑制H9c2心肌细胞增殖,Apbb1可能通过影响细胞周期G2/M期影响心肌细胞增殖,KAT5蛋白可能与APBB1蛋白互作影响心肌细胞增殖。

摘要： 为了观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖和缺氧耐受的影响,体外培养H9C2心肌细胞后,将其分为对照组和多肽组,对照组只使用10%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理,多肽组在对照组处理的基础上分别加入浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L的多肽K-YFAE,7 d后对各组细胞分别行CCK-8检测、细胞周期的流式细胞术检测、细胞周期相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖的影响;用三气培养箱对细胞行缺氧处理后分组,并分别行细胞凋亡的TUNEL检测和流式细胞术检测,以及细胞凋亡相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞缺氧耐受的影响。结果显示:与对照组比较, K-YFAE的干预可促进H9C2心肌细胞进入增殖期,并且减少其凋亡。实验结果初步表明,多肽K-YFAE既可以促进H9C2心肌细胞增殖,又可以增加其缺氧耐受。

摘要： 目的探讨阿魏酸甲酯对H9c2心肌细胞缺氧损伤后线粒体功能的影响。方法将细胞分为正常组(不给药、不造模),缺氧模型组(仅造模),阿魏酸甲酯高、中、低(40、20、10μmol/L)剂量组,阳性对照药组(环孢菌素A,1μmol/L)。各给药组细胞经药物预处理及缺氧损伤造模后,检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、三磷酸腺苷(ATP)水平,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位、线粒体膜通透性转换孔开放情况的变化。结果与缺氧模型组比较,阿魏酸甲酯高、中、低剂量组H9c2心肌细胞中LDH、MDA、CK水平和ROS荧光强度均显著降低,ATP水平均显著升高(P<0.01或P<0.05);线粒体膜电位红/绿荧光强度比值和线粒体膜通透性转换孔绿色荧光强度均显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论阿魏酸甲酯能逆转缺氧损伤H9c2心肌细胞的生化指标水平,稳定线粒体膜电位,降低线粒体膜通透性转换孔的开放程度,对缺氧损伤H9c2心肌细胞线粒体功能具有明显的保护作用,且这种保护作用呈剂量依赖趋势。

摘要： 目的·探讨长链非编码RNA-B230352I09(long non-coding RNA-B230352I09,lncRNA-B230352I09)表达改变对H9C2心肌细胞增殖及周期的影响。方法·构建lncRNA-B230352I09过表达载体(pcDNA-B230352I09)和阴性对照(negative control,NC)载体(pcDNA-NC),借助阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)转染液将上述构建的载体转染至H9C2心肌细胞。实验分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA-B230352I09过表达组,分别通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测lncRNA-B230352I09的表达量,验证其转染效率;细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测H9C2心肌细胞在450 nm波长的吸光度(optical density,OD)并绘制生长曲线;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)标记增殖期H9C2心肌细胞并通过荧光显微镜观察增殖心肌细胞的数量;流式细胞术分析H9C2心肌细胞在不同细胞周期所占比例;RT-PCR检测H9C2细胞周期相关调控基因的表达情况。结果·与阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中lncRNA-B230352I09的表达水平显著升高(P=0.000),提示lncRNA-B230352I09转染H9C2心肌细胞模型构建成功。CCK8实验显示,与阴性对照组相比,lncRNA-B230352I09过表达可显著提高H9C2心肌细胞的OD值,促进H9C2心肌细胞增殖,表现为明显的时间依赖性细胞增殖能力增强(24 h:P=0.000;48 h:P=0.000;72 h:P=0.001);荧光显微镜观察发现,与阴性对照组相比,lncRNA-B230352I09过表达组中EdU标记阳性的H9C2心肌细胞比例明显增多;流式细胞术分析显示,和阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中处于S期的H9C2心肌细胞比例明显增加,G 1期心肌细胞的比例下降(P=0.000);RT-PCR检测结果显示,与阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中H9C2心肌细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin dependent protein kinase 1,CDK1)的mRNA表达水平显著升高(P=0.000)。结论·lncRNA-B230352I09通过调节cyclin D1和CDK1促进心肌细胞进入S期,增强H9C2心肌细胞增殖能力。

摘要： 目的探究坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9c2心肌细胞肥大的干预作用及机制研究。方法体外培养H9c2心肌细胞,采用AngⅡ(100 nmol/L)刺激心肌细胞24 h、48 h和72 h,建立心肌细胞肥大模型,利用细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞大小,实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(Western Blot)检测心肌细胞中心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及组织金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达水平,确定AngⅡ干预的最佳作用时间。随后将H9c2心肌细胞分别与不同浓度坎离颗粒共同处理,采用CellTiter-Glo发光法检测坎离颗粒对心肌细胞活力的影响,确定坎离颗粒的安全无毒剂量区间。实验分为空白组、AngⅡ组、坎离颗粒低剂量组、坎离颗粒中剂量组和坎离颗粒高剂量组。采用qRT-PCR和Western Blot检测心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC、MMP-1、MMP-9以及TIMP-1的蛋白表达水平,以观察坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2细胞肥大的干预作用。结果AngⅡ处理H9c2细胞48 h后,心肌肥大程度最为明显,细胞形态与体积明显增大,且细胞内ANP、BNP、β-MHC、MMP-1、MMP-9以及TIMP-1等肥大基因的mRNA和蛋白表达水平明显增加。坎离颗粒能够抑制AngⅡ诱导的心肌肥大,qRT-PCR与Western Blot法检测结果显示坎离颗粒可明显抑制AngⅡ所诱导的ANP、BNP、β-MHC的mRNA上调;并抑制心肌细胞中MMP-1、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平。结论坎离颗粒能够明显下调心肌肥大多项指标的基因与蛋白表达水平,揭示坎离颗粒通过抑制肥大因子的上调来拮抗AngⅡ引起的心肌肥大,这可能是坎离颗粒发挥治疗作用的机制之一。

摘要： 靶向的基因转染技术在现今的临床基因治疗中越来越受到重视.该研究旨在明确通过超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺是否能够有效的提高大鼠H9c2心肌细胞的基因转染率,阐述利用这一新技术,将ShRNA的基因沉默作用应用于靶向干扰Bax基因.研究结果表明UTMD能够协同帮助其他基因转导方法在活体内的应用发展。能够作为一种安全、有效、无创的基因转导系统。UTMD联合PEI，能够显著增强组织中质粒的基因表达，是一种有发展前景的活体内基因转导方法。超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺能明显增加大鼠H9c2心肌细胞转染率及基因的表达，有效的沉默Bax基因。这种非病毒的转染方式能帮助通过shRNA沉默Bax基因的表达，抑制细胞凋亡。有望成为有效的心脏疾病的基因治疗方法。

摘要： 靶向的基因转染技术在现今的临床基因治疗中越来越受到重视.该研究旨在明确通过超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺是否能够有效的提高大鼠H9c2心肌细胞的基因转染率,阐述利用这一新技术,将ShRNA的基因沉默作用应用于靶向干扰Bax基因.研究结果表明UTMD能够协同帮助其他基因转导方法在活体内的应用发展。能够作为一种安全、有效、无创的基因转导系统。UTMD联合PEI，能够显著增强组织中质粒的基因表达，是一种有发展前景的活体内基因转导方法。超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺能明显增加大鼠H9c2心肌细胞转染率及基因的表达，有效的沉默Bax基因。这种非病毒的转染方式能帮助通过shRNA沉默Bax基因的表达，抑制细胞凋亡。有望成为有效的心脏疾病的基因治疗方法。

摘要： 靶向的基因转染技术在现今的临床基因治疗中越来越受到重视.该研究旨在明确通过超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺是否能够有效的提高大鼠H9c2心肌细胞的基因转染率,阐述利用这一新技术,将ShRNA的基因沉默作用应用于靶向干扰Bax基因.研究结果表明UTMD能够协同帮助其他基因转导方法在活体内的应用发展。能够作为一种安全、有效、无创的基因转导系统。UTMD联合PEI，能够显著增强组织中质粒的基因表达，是一种有发展前景的活体内基因转导方法。超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺能明显增加大鼠H9c2心肌细胞转染率及基因的表达，有效的沉默Bax基因。这种非病毒的转染方式能帮助通过shRNA沉默Bax基因的表达，抑制细胞凋亡。有望成为有效的心脏疾病的基因治疗方法。

摘要： 靶向的基因转染技术在现今的临床基因治疗中越来越受到重视.该研究旨在明确通过超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺是否能够有效的提高大鼠H9c2心肌细胞的基因转染率,阐述利用这一新技术,将ShRNA的基因沉默作用应用于靶向干扰Bax基因.研究结果表明UTMD能够协同帮助其他基因转导方法在活体内的应用发展。能够作为一种安全、有效、无创的基因转导系统。UTMD联合PEI，能够显著增强组织中质粒的基因表达，是一种有发展前景的活体内基因转导方法。超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺能明显增加大鼠H9c2心肌细胞转染率及基因的表达，有效的沉默Bax基因。这种非病毒的转染方式能帮助通过shRNA沉默Bax基因的表达，抑制细胞凋亡。有望成为有效的心脏疾病的基因治疗方法。

摘要： 靶向的基因转染技术在现今的临床基因治疗中越来越受到重视.该研究旨在明确通过超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺是否能够有效的提高大鼠H9c2心肌细胞的基因转染率,阐述利用这一新技术,将ShRNA的基因沉默作用应用于靶向干扰Bax基因.研究结果表明UTMD能够协同帮助其他基因转导方法在活体内的应用发展。能够作为一种安全、有效、无创的基因转导系统。UTMD联合PEI，能够显著增强组织中质粒的基因表达，是一种有发展前景的活体内基因转导方法。超声靶向微泡破裂联合聚乙烯亚胺能明显增加大鼠H9c2心肌细胞转染率及基因的表达，有效的沉默Bax基因。这种非病毒的转染方式能帮助通过shRNA沉默Bax基因的表达，抑制细胞凋亡。有望成为有效的心脏疾病的基因治疗方法。

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明涉及产生胚胎干细胞来源的心肌细胞的方法和由所述方法产生的心肌细胞、由心肌细胞产生心肌细胞聚集体的方法和由所述方法产生的心肌细胞聚集体、用于治疗心脏病的包含所述心肌细胞聚集体作为活性成分的细胞治疗产品、使用所述细胞治疗产品治疗心脏病的方法、以及心肌细胞和心肌细胞聚集体用于产生细胞治疗产品的用途。通过使用本发明的产生心肌细胞的方法，可以容易地纯化胚胎干细胞来源的心肌细胞，并且心肌细胞聚集体可以由纯化的心肌细胞产生，因此可用作可以用于治疗心脏病的细胞治疗产品。因此，本发明可以广泛用于开发用于预防或治疗多种心脏病的制剂。

摘要： 本发明公开了一种诱导干细胞往心肌细胞方向分化及心肌细胞传代与纯化的方法及药剂，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控及维持技术领域。该诱导干细胞往心肌细胞方向分化的方法包括：将人多能干细胞置于含烟酰胺的第一培养基中培养，第一培养基为E5培养基。心肌细胞的传代方法包括：将心肌细胞置于含烟酰胺的第二培养基中培养，第二培养基为E6培养基。心肌细胞的纯化方法包括：将传代处理后的心肌细胞置于含烟酰胺的第三培养基中培养，第三培养基为E6培养基。上述方法能够为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生和传代培养提供有效可行的新方法，且效率稳定，费用较低，利于大规模生产。相应的药剂应用前景较广。

摘要： 本发明公开了一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控技术领域，其包括以下步骤：于含有分化第3‑5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂以诱导干细胞向心肌方向分化。该方法的特点是采用氯离子阻断剂来诱导干细胞向心肌方向分化。本申请详细阐述了该方法的具体操作步骤，并对分化的心肌细胞进行了鉴定和功能分析，为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生提供了新思路。

摘要： 本发明涉及细胞片的制造方法，所述方法包含下述工序：在使动物细胞朝培养液的中央方向集中的同时对培养液中分散的动物细胞进行悬浮培养，在所述培养液中形成悬浮的细胞片。

摘要： 公开了用于从多能干细胞产生心肌细胞群体的方法。群体可以对于心房心肌细胞或心室心肌细胞进行富集，并且所得到的心室群体可以基本上不含起搏细胞。该方法包括使在合适的培养基中的多能干细胞与BMP组分和激活素组分一起温育，激活素的量可以改变以富集心房心肌细胞或心室心肌细胞。公开了富集的群体，以及使用其治疗需要心脏修复的患者的方法。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。