传代

摘要： 在海鲜菇工厂化栽培模式下,比较分析母种继代和菌种不同扩繁工艺对其营养生长和生殖生长的影响。结果:母种继代从第1代到第8代,在营养生长阶段,菌丝萌发时间均为24 h,满袋时间F_(2)~F_(8)与对照F_(1)均为35~36天,无显著性差异。在生殖生长阶段,菌袋后熟时间,随传代数(F_(2)~F_(8))的增加,呈延长的趋势;原基形成时间,各处理均为8~9天;F_(2)~F_(8)代间的产量存在显著差异,即随继代数的增加,单产逐步下降,呈负相关性。通过与常规固体三级菌种扩繁工艺比较,液化菌种工艺的菌丝萌发时间提早12 h,满袋时间缩短10天,后熟期减少20天,污染率下降4.6个百分点,原基形成早2天,生物转化率提高15.6个百分点,且子实体整齐、朵形好。

摘要： 目的 探讨体外特殊条件下鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)连续传代培养后在感染性、生长发育以及致病性等生物学性状上的变化,为筛选减毒活疫苗,筛查毒力相关基因提供依据.方法 将实验室Cm野生株(G0)通过常规细胞培养,在辅助或不辅助培养条件下交替连续传代后,将亲本株G0与获得的传代株G28进行衣原体感染离心依赖性、细胞吸附能力、衣原体感染细胞生长曲线、衣原体形成的噬斑大小以及两种菌株在感染小鼠生殖道后所形成的输卵管病变情况进行检测.结果 与亲本株G0相比,传代株G28对感染离心条件的依赖性显著下降(P＜0.05);对感染细胞的吸附能力却明显上升(P＜0.05);G0与G28在感染细胞32 h内的生长曲线差异并无统计学意义;在感染细胞中所形成的噬斑大小也无明显区别;但体内毒力试验中,G0感染小鼠后致输卵管病变率为87.5％,而G28的输卯管病变率仅为37.5％,两者形成差异有统计学意义.结论 Cm传代株G28与亲本株G0相比,在感染能力显著增强的情况下,其致病性却显著降低,为后续鉴定毒力基因,进一步提取基因型单一的减毒株并应用于衣原体减毒活疫苗带来了希望.

摘要： 为揭示富集传代培养过程中南极多环芳烃降解菌群的演替规律,以菲为唯一碳源和能源对南极菲尔德斯半岛不同地理位置的6份土壤样品进行了富集和连续传代培养,并采用高通量测序技术分析了富集传代培养过程中菲降解菌群的群落结构及生物多样性.Alpha多样性分析结果表明,在富集培养阶段南极菲降解菌的物种丰富度显著高于传代培养阶段(P＜0.05),但传代培养阶段的代际物种丰富度无显著差异(P＞0.05).Beta多样性分析结果表明富集培养阶段与传代培养阶段的群落结构具有显著性差异(P＜0.05),但传代培养阶段菲降解菌群趋于相对稳定,代际间群落结构无显著性差异(P＞0.05).大量微生物在富集培养阶段丰度较高,但因不能适应实验室培养条件或不能利用菲而在传代培养阶段被淘汰.反之,假单胞菌属(Pseudomonas)、鞘氨醇菌属(Sphingobium)、贪噬菌属(Variovorax)、甲基娇养杆菌属(Methylotenera)和产碱杆菌属(Alcaligenes)等适应了该选择压力并在传代培养阶段形成了动态平衡的优势种群.此外,Pseudomonas、Sphingobium和Variovorax等在富集传代培养过程中具有显著性差异的优势种在维持群落的动态平衡中也发挥着重要的作用.该研究有助于加深人们对南极土壤环境中持久性有机污染物的降解潜力以及关键微生物动态变化的认识,为下一步充分挖掘利用南极环保功能微生物资源提供重要的依据.

摘要： 目的 探索改进大鼠原代骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的分离培养方法,以获取生长状态良好、数量多、传代所需时间短的BMSCs.方法 选取6周龄的SD大鼠,从长骨中提取BMSCs,采用细胞刮刮取法(A组)、胰蛋白酶消化法(B组)及胰蛋白酶消化合并细胞刮刮取法(C组)分离BMSCs,比较原代培养瓶剩余细胞数量、P1代每高倍视野细胞数目、传代后到收获所需的时间.结果 A组与C组贴壁细胞数目较少,镜下多数区域几乎未见BMSCs,分离较为彻底;B组瓶底可见较多贴壁细胞,呈圆形,形态相似,大小均一传代后.第1天时C组BMSCs贴壁数目明显多于其余两组(P<0.001),同时各组培养基中可见少量悬浮细胞.第2天起C组贴壁细胞开始呈现鱼群状分布趋势,其余两组仍呈散在分布.第7天时,C组细胞几乎长满瓶底,BMSCs生长融合达80％ ～90％,其余两组细胞间隙较大,仍未达到收获标准.C组在传代后第5天便有1瓶BMSCs长满瓶底,其余各瓶第7天时也几乎达到收获标准.A组从传代到收获所用时间为(8.1±0.8)d,B组所用时间为(10.3±0.8)d,C组所用时间为(6.7±0.9)d.C组收获时间明显短于其余两组(P<0.001).结论 胰蛋白酶消化合并细胞刮刮取法是一种快速、实用、高效的骨髓间充质干细胞分离培养技术.

摘要： 目的 比较不同代数人头皮毛乳头(Dermal papilla,DP)细胞体外培养方法 及其形态学差异.方法 从人头皮分离DP细胞进行原代培养,传代培养至第9代,观察、记录不同代数细胞形态、多层聚集性变化.结果 1～3代DP细胞呈梭形,具有明显的多层聚集生长特性;而4代以上形状不规则DP细胞逐渐增多,细胞传代时间从低代的2～3周延长至6周以上,多层聚集性逐渐消失.结论 体外培养的DP细胞随着代数次数增加,其生长速度、形态、多层聚集性等特性发生显著改变.

摘要： 目的 探讨药品试验常用标准菌种斜面保藏法的保存效果及期限,为实验室管理和使用标准菌种提供参考和依据.方法 根据2015年版《中国药典》四部对标准菌种的要求,对能使用斜面保藏法保藏的常用标准菌种进行接种、培养和保存,定期检查菌种活性和特性,对保藏方法、条件、期限等进行记录和评估.结果 各标准菌种在使用相应培养基、相应保藏条件下,试验保藏期限内菌种状态良好,且5代标准菌种之间无明显差异.结论 本法可满足标准菌种的短期保藏需要,实际工作中可同时使用多种保藏方法确保菌种质量.

摘要： 为研究鸽副黏病毒ND167在SPF鸡胚传代中毒力和F基因序列变化,运用有限稀释法将ND167连续传代扩繁,每代次均选择病毒稀释度最高且血凝价最高的尿囊液进行传代,共传10代次,测定第1、5和10代次的最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和F基因序列.结果表明,ND167在鸡胚传代过程中F蛋白裂解位点氨基酸虽未突变,但是毒力却在逐渐增强,从中等毒力株演变为强毒力株.说明对于PPMV毒力判定需要根据动物实验进行,需警惕PPMV在鸡群中反复传代引起毒力增强.%In order to study the virulence and F gene sequence of ND167 in 10-day-old specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos,the virus was passaged by chicken embryo Limit dilution method.Allantonic fluid with the highest dilution rate and hemagglutiantion titer was chosen for further Limit dilution.We purified ND167 for 10 generations,and the MDT,ICPI and F gene sequences of the 1st,5th and 10th generation were determined.The results showed that the amino acid of F protein cleavage site in ND167 was not changed and no significant mutation was found during the purification,but the virulence was gradually increased from medium virulent strain to highly virulent strain.This result suggests that the researchers should determine PPMV virulence based on animal experiments and be alert to the increased virulence of PPMV in the flocks caused by repeated passage.

摘要： 酿酒酵母在进行连续传代的过程中,细胞的形态结构以及细胞内的各项生理指标因受胁迫条件的影响而发生改变,细胞出现逐渐衰老现象.深入了解酿酒酵母在传代中的生理变化对酿酒酵母抗衰老研究具有重要意义.文中综述了酿酒酵母在传代过程中各项生理指标的变化,并提出了进一步研究的方向,以期为酵母在工业生产中的抗衰老研究提供理论依据和参考.%The morphological structure and physiological indexes of Saccharomyces cerevisiae have changed during serial re-pitching due to the stress conditions in serial handlings and the cells become aging.It is of great significance to study the physiological changes of S.cerevisiae during serial re-pitching to understand the anti-aging effect of S.cerevisiae.In this paper,the changes of the physiological indexes during re-pitching of yeast are summarized,and based on the analysis of the previous works further research directions are proposed.

摘要： The bacterial species is an important biological resource owned by a country.The preservation of strains is an extremely important microbiological basic work.Under natural conditions,bacterial contamination and death are inevitable.The passaging and inoculation of microorganisms is a basic operating technique for the preservation of strains,which is of great significance for the preservation of strains.%菌种是一个国家所拥有的重要生物资源,菌种保存是一项极其重要的微生物学基础工作.在自然条件下,菌种的污染、死亡都是不可避免的.而微生物的传代、接种技术是菌种保存的一项基本操作技术,对菌种保存意义重大.

摘要： 目的：建立定量PCR方法监测外源基因在不同重组痘苗代次中的稳定性。rn 方法：裂解法提取八个代次插入有HIV基因的重组痘苗DNA，用定量PCR的绝对和相对定量方法，研究不同代次基因组中插入的外源基因与痘苗基因组的数量关系。rn 结果: 绝对和相对定量方法均证明，在传代过程中，重组痘苗中的外源基因有缺失现象。rn 结论: 建立的定量PCR方法可以特异、定量的分析外源基因在重组痘苗中的稳定性。

摘要： 目的：通过研究WHO指定流感疫苗株在Vero细胞上的适应性，从而为Vero细胞培养流感疫苗打下基础。rn 方法：选择不同培养基、胰酶浓度、PH值培养流感病毒，寻找出细胞培养病毒的适宜条件，并对流感疫苗毒株在Vero细胞上进行传代。rn 结果: 在病毒维持液成分为：DMEM/F12、PH为7.5、胰酶含量1.5μg/ml、培养3天收获病毒时可获得较高的病毒血凝效价，连续传代4代效价降为0。rn 结论: WHO推荐的流感疫苗毒株在Vero细胞上连续传代病毒血凝效价逐渐降低。

摘要： 实验探讨了不同胰蛋白酶浓度对PK细胞传代消化的影响,结果显示0.05％胰酶浓度分散最适于PK细胞的传代消化.

摘要： 本文通过幼年人成骨细胞体外培养传代退行性衰退与70岁以上老年人成骨细胞形态、增殖、功能与基因表达的比较、研究培养代数的改变与年龄的相关性,建立幼年人成骨细胞体外培养传代退行性衰退模型.

摘要： 采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)平板初筛法，分别从北京、大连、日本三个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株(NY-1～NY-10)和10株产纤维素酶菌株(NS-1～NS-10)。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株，NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验，得出NY-1的最佳种龄为16h，最佳芽孢收获时间为28h，芽孢量的对数值为6.92±0.047、蛋白酶产酶高峰时间为18h，酶活力为44.12±1.48U/mL，；NS-1的最佳种龄为14h,最佳芽孢收获时间为28h，芽孢量的对数值为8.41±0.0060，纤维素酶产酶高峰时间为40h，酶活力为60.94±1.22U/mL，蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。

摘要： 本文用RPMI-1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞休(M.suis)的基础培养基，以无附红细胞体感染的兔红细胞泥作为培养寄生载体，置于含5％CO2的37°C生化恒温培养箱进行猪附红细胞体的体外培养研究。结果表明，培养时每24h换培养液一次，每36h传代一次，可连续传代40次以上，并能保持最高感染率90％以上;感染M.suis的猪红细胞在4°C条件下可保持30d以上而不发生溶血;兔红细胞接种新鲜制备的自然感染Msuis的猪红细胞，36h后感染率可达90％左右并一直维持到96h，96h后有少量细胞开始出现溶血;接种4°C条件下保存30天(d)以内自然感染M.suis的猪红细胞与新鲜制备的自然感染M.suis的猪红细胞对兔红细胞的感染率影响差异不显著。

摘要： 胰岛素样生长因子(IGF-1)重组菌株pCST/IGF/W3100,在含Tet 5μg/ml的LB培养基平板上划线传代培养100代,经过其表达水平、质粒性状及遗传稳定性、染色体特性等一系列检定后,其结果表明均与原始菌种一致,且无支原体及其他微生物污染,为其规模化生产奠定了基础.

摘要： 本发明公开了可传代培养的羊睾丸细胞及其传代驯化培养方法及专用培养体系与应用，提供了一株可传代培养的羊睾丸传代细胞LT‑1(CGMCC No.12988)以及驯化培养获得该细胞的方法。本发明采用优化的细胞培养液对羊睾丸原代细胞(LT)进行传代驯化培养，可使羊睾丸原代细胞增加传代次数，适于批量生产；并利用该细胞对羊口疮病毒进行增殖培养，结果显示，羊口疮病毒能连续传代培养3代，均能产生明显的病变，病毒含量可达107.5TCID50/mL，可用于羊口疮病毒的增殖培养和疫苗制备。

摘要： 本发明公开了一种B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用。本发明通过在Vero细胞中连续传代来致弱LN16‑V毒株，获得了致弱株LN16‑A，命名为LN16‑A株，其保藏号为：CGMCC NO.45261。将传代致弱株LN16‑A免疫3周龄SPF鸡并进行了系统的免疫保护评价，结果表明LN16‑A免疫机体后，可以诱导产生较高水平的aMPV特异性抗体和中和抗体，对强毒的攻击可提供100%的免疫保护，具有良好的免疫保护效果，可以有效预防强毒攻击造成的病理损伤。本发明为B亚型禽偏肺病毒病的防控提供了新的技术手段，对家禽业健康发展具有重要意义。

摘要： 本发明公开了可传代培养的羊睾丸细胞及其传代驯化培养方法及专用培养体系与应用，提供了一株可传代培养的羊睾丸传代细胞LT‑1(CGMCC No.12988)以及驯化培养获得该细胞的方法。本发明采用优化的细胞培养液对羊睾丸原代细胞(LT)进行传代驯化培养，可使羊睾丸原代细胞增加传代次数，适于批量生产；并利用该细胞对羊口疮病毒进行增殖培养，结果显示，羊口疮病毒能连续传代培养3代，均能产生明显的病变，病毒含量可达10

摘要： 传代时期算出装置具备：时间变化算出部，根据改变时间而拍摄了多能性干细胞的多个显微镜图像，算出出现了筋状的花纹的区域即提取对象区域所占的面积的时间变化；变化点检测部，检测所述提取对象区域所占的面积的时间变化的变化点；及传代时期算出部，基于所述变化点来决定所述多能性干细胞的传代时期。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，涉及一种用于传代干细胞的无动物源传代方法，具体涉及一种临床级干细胞无动物源成分消化液、消化终止液的制备及干细胞无动物源传代方法。一种用于传代临床级干细胞的无动物源传代方法包括以下步骤：提取人羊膜、脐带间充质干细胞，常规培养至第三代，进行细胞鉴定；将第三代人羊膜、脐带间充质干细胞接种于75cm2培养瓶中培养，待汇合度达到80‑90%；应用无动物源成分消化液、消化终止液将人羊膜、脐带间充质干细胞传代。本发明提供的用于传代干细胞的无动物源传代方法，既符合无动物源成分标准，又能有效消化干细胞至单细胞形态，进而均匀接种干细胞，达到最佳培养状态。

摘要： 本发明公开了一种转瓶细胞传代装置及细胞传代方法，包括：营养液添加罐，其上部设有进料口，其顶部中心还通过固定架固定有搅拌电机，搅拌电机的搅拌轴向下穿入到营养液添加罐的容置腔下部且连接有搅拌叶，其底部还设有出料口，出料口上设有第一阀；若干个转瓶，其上部具有可启闭的转瓶瓶口；第一输送机构，一端与营养液添加罐的出料口连接，另一端用于与转瓶的转瓶瓶口可拆卸连接，且用于将营养液添加罐的营养液输入到转瓶中；喷淋头，用于辅助分散附着于转瓶内壁上的细胞；若干分装瓶，用于分装转瓶中经分散的细胞，其上部具有可启闭的分装瓶瓶口；第二输送机构，一端与转瓶连接，另一端与分装瓶连接，该方案实施可靠，效率高，节约人力。

摘要： 本发明提供了一种贴壁细胞传代培养系统及传代培养方法，其包括：形成密闭空间的箱体、桥接设备、电动加液设备、电动去液设备、离心设备、电动摇匀设备、封闭通道以及培养箱，桥接设备、电动加液设备、电动去液设备、离心设备以及电动摇匀设备均设置在箱体中，桥接设备设置在电动加液设备、电动去液设备、离心设备、电动摇匀设备以及培养箱之间；电动加液设备、电动去液设备以及离心设备顺序排布设置；培养箱设置在箱体外，桥接设备的一端通过封闭通道与培养箱连通；用于控制所述桥接设备、电动加液设备、电动去液设备、离心设备、电动摇匀设备以及培养箱联动的控制器。

摘要： 本发明公开了一种甲状腺类器官培养基、甲状腺类器官培养及传代方法，甲状腺类器官培养基包括Advanced DMEM/F12培养基和如下组分：B‑27、N‑乙酰半胱氨酸、烟酰胺、R‑spondin1重组蛋白、头蛋白、Wnt‑3a、表皮细胞生长因子、A83‑01、促甲状腺激素、氢化可的松、胰岛素、成纤维细胞生长因子‑10以及Y27632。本发明甲状腺类器官培养基创新地添加了促甲状腺激素、氢化可的松和胰岛素，通过添加促甲状腺激素能够显著促进甲状腺类器官形成，通过添加氢化可的松能够有效促进细胞增殖生长效应,能提高克隆形成率，通过添加胰岛素能够维持细胞干性，提高传代效率，本发明的甲状腺类器官培养基能够很好地进行甲状腺类器官培养。

摘要： 本发明公开了一种纸片载体固定床培养细胞传代罐传罐放大方法，是基于纸片载体固定床反应器实现的细胞传代放大方法；所述纸片载体固定床反应器包含反应罐及设置在反应罐内的纸片载体固定床，所述纸片载体固定床包含一个环形上网板、一个可向下折叠式环形下网板、一个中间筒及两个固定床下网板操作杆，环形上网板及可向下折叠式环形下网板分设在中间筒的上下部，两个固定床下网板操作杆分设在中间筒的左右侧，用于控制纸片载体固定床的可向下折叠式环形下网板向下开启，使装载在纸片载体固定床中的纸片载体落入到反应罐底进行细胞在线消化，从而实现细胞传代罐传罐放大培养。本发明优点是：工艺简单可控，耗时短，效率高，污染风险低，细胞质量可控。

摘要： 本申请涉及一种促进胰岛前体细胞长期稳定传代和大量制备功能成熟的胰岛细胞及胰岛类器官的方法。该方法采用至少含有BET抑制剂和TGFβ抑制剂的培养基培养胰岛前体细胞，能够使胰岛前体细胞在多次传代后保持原有特性，且由其获得的胰岛细胞及胰岛类器官也具有正常的功能。因此，本申请的方法能够大量制备质量稳定而均一的胰岛前体细胞，并进一步制备足量的胰岛细胞及胰岛类器官，可用于疾病建模、药物筛选和糖尿病的治疗，具有十分广阔的应用前景。