细胞毒活性

摘要： 为研究烟管头草(Carpesium cernuum)的化学成分及其细胞毒活性,采用多种色谱分离技术从烟管头草的95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到10个化合物。通过现代波谱技术鉴定了它们的结构,分别为(5 Z)-6-[(acetyloxy)methyl]-2-oxo-2,10,14-trimethylhexadeca-5,13-diene-11α-ol(1)、(2 E,10 E)-1,12-dihydroxy-18-acetoxy-3,7,15-trimethylhexadeca-2,10,14-triene(2)、(2 E,6 Z,10 E,12 R)-7-[(acetyloxy)methyl]-3,11,15-trimethylhexadeca-2,6,10,14-tetraene-1,12-diol(3)、(2 E,6 Z,11 S,12 R)-3,7,11,15-tetramethylhexadeca-2,6,14-triene-7-[(acetyloxy)methyl]-1,12,19-triol(4)、plaunotol(5)、S-(+)-dehydrovomifoliol(6)、pubinernoid A(7)、豆甾醇(8)、aurantiamide acetate(9)、反式对羟基肉桂酸(10),其中化合物1为新化合物。采用MTT法对人乳腺癌细胞MDA-MB-231进行细胞毒活性,结果表明,化合物2有较强的细胞毒活性,其IC_(50)值为6.80μmol/L,化合物1、3和4有中等细胞毒活性。

摘要： 目的从灵芝中制备总黄酮,并探讨其体外细胞毒活性。方法回流提取法结合聚酰胺柱色谱法从灵芝中制备总黄酮提取物;紫外-可见分光光度法测定醇浸膏及总黄酮提取物中总黄酮含量;MTT法测试灵芝总黄酮提取物的细胞毒活性。结果灵芝醇提浸膏与聚酰胺按质量比为1∶1混匀后装柱,先用40%乙醇洗脱,再用无水乙醇洗脱,收集无水乙醇洗脱液,减压浓缩蒸干得灵芝总黄酮提取物。醇浸膏中含总黄酮含量为8.98%,灵芝总黄酮提取物中总黄酮含量为18.09%。灵芝总黄酮提取物在体外对人胰腺癌MIA-PACA-2和人乳腺癌MDA-MB-231肿瘤细胞的增殖有抑制作用,IC_(50)分别为(123.7±4.1)μg·mL^(-1)和(196.1±2.5)μg·mL^(-1)。对HepG2、SMM C7721和HL-60细胞的增殖抑制作用较弱。结论聚酰胺可富集灵芝中总黄酮,灵芝总黄酮提取物对人胰腺癌MIA-PACA-2细胞和人乳腺癌MDA-MB-231细胞有一定细胞毒活性。

摘要： 目的研究1株深海来源曲霉属真菌Aspergillus sp.WHUF0313的次级代谢产物及其生物活性。方法采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析和半制备高效液相色谱等技术对该菌株的次级代谢产物分离纯化,并通过核磁共振波谱(NMR)、质谱(MS)等方法,结合相关文献对比鉴定化合物结构;分别采用肉汤微量稀释检测法和MTS细胞增殖与毒性检测法对化合物进行抗菌和肿瘤细胞毒活性测试。结果从Aspergillus sp.WHUF0313的发酵产物共分离得到9个化合物,分别为asperophiobolin G(1)、asperophiobolin F(2)、ophiobolin Q(3)、asperophiobolin H(4)、6-epi-ophiobolin G(5)、ophiobolin H(6)、6-epi-ophiobolin K(7)、6-epi-21,21-O-dihydroophiobolin G(8)和asperophiobolin J(9)。结论海洋真菌Aspergillus sp.WHUF0313能产生多种活性次级代谢产物,化合物4对小鼠黑色素瘤B16有一定的细胞毒活性,化合物6和7具有较强的抗多重耐药幽门螺杆菌和抗金黄色葡萄球菌活性,因此该菌具有开发为微生物源药物的潜在研究价值。

摘要： 以OSMAC策略为指导,研究深海真菌Stachybotrys sp.3A00409的次级代谢产物多样性,对其燕麦大米培养基发酵产物中与原始培养基具有差异的部分进行靶向分离,共得到7个单体化合物,鉴定为丁内酯类化合物butyrolactone-Ⅰ(1)、butyrolactone-Ⅲ(2)、butyrolactone-Ⅱ(3)、2-O-methylbutyrolactone-Ⅱ(4)、萘类化合物methyl-6-acetyl-4-methoxy-5,7,8-trihydroxy-naphthalene-2-carboxylate(5)、吡喃酮衍生物pyrophen(6)和阿魏酸(7)。抗肿瘤实验结果显示化合物1,2,7对人口腔上皮癌KB细胞表现出了较强的增值抑制作用,IC_(50)在1.18~1.34μg∙mL^(-1)。

摘要： 目的研究椭圆叶米仔兰Aglaia rimosa(Blanco)Merrill茎枝的化学成分及其生物活性。方法椭圆叶米仔兰茎枝95%乙醇提取物采用硅胶、ODS、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用稀释涂布平板法、MTT法分别测定其抗菌和细胞毒活性。结果从中分离得到17个化合物,分别鉴定为(±)⁃6⁃linalyl⁃7⁃hydroxycoumarin(1)、β⁃谷甾醇⁃3⁃O⁃6⁃棕榈酰葡萄糖苷(2)、(+)⁃儿茶素(3)、表儿茶素(4)、lyratol F(5)、3⁃羟基⁃1⁃(4⁃羟基⁃3,5⁃二甲氧基苯基)⁃1⁃丙酮(6)、(2R,3S)⁃5,7,3′⁃tri⁃omethyl⁃(-)⁃epicatechin(7)、育亨宾(8)、α⁃棕榈精(9)、表没食子儿茶素(10)、gallocatechin⁃(4′⁃O⁃7)⁃epigallocatechin(11)、(-)⁃南烛木树脂酚⁃3α⁃O⁃β⁃D⁃吡喃葡萄糖苷(12)、(+)⁃异落叶松脂素⁃9′⁃O⁃β⁃吡喃葡萄糖苷(13)、(6S,7S,8R)⁃7α⁃[(β⁃D⁃glucopyranosyl)oxy]isolariciresinol(14)、原花青素B1(15)、原花青素B2(16)、原花青素B3(17)。化合物4、10~11、15~17对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(MIC)分别为1.0、1.0、1.0、1.0、0.8、1.0 mg/mL。化合物1、6、10~11、15~16对7种细胞株表现出不同程度的细胞毒性。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物10~11、15~16均表现出抗菌和抑制肿瘤细胞株增殖的作用。

摘要： 采用硅胶和凝胶柱色谱技术,结合现代波谱学方法及其理化性质分析,从旱芹菜(Apium graveolens L.)干燥根醇提物乙酸乙酯部位中共分离鉴定了9个化合物,分别为软脂酸(1)、肉桂醛(2)、柚皮素(3)、异东莨菪素(4)、花椒毒素(5)、6-甲基-5,7-二羟基苯酞(6)、2-苯基乙基-O-β-D-葡萄糖苷(7)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(8)、红景天苷(9)。其中化合物3、4、6、7和9首次从该属植物中分离得到。采用MTT法测试化合物1~9对人肝癌细胞株BEL-7402、胃癌细胞SGC-7901和人肺癌细胞A549的体外细胞毒活性,结果表明,化合物4对肺癌细胞A549的生长具有一定的抑制作用。

摘要： 本课题组前期研究发现,小蓟乙醇提取石油醚萃取部位具有较好的抑制多种人肿瘤细胞毒活性的作用,现对其中强活性亚组分的化学成分进行研究,挖掘发挥细胞毒活性的功能因子。在体外抑制细胞毒活性指导下,应用多种色谱技术进行分离纯化,采用波谱学方法进行结构鉴定,并结合文献数据对照确定化合物结构。从石油醚的1个活性组分中共分离鉴定了5个甾体化合物,分别为:3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮、豆甾-22-烯-3β,5α,6β-三醇、6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮、6β-羟基-豆甾-4,22-二烯-3-酮和6β-羟基-芸苔甾-4-烯-3-酮。5个化合物均为首次从蓟属植物中发现;除化合物α-豆甾-22-烯-3β,5α,6β-三醇外,其余4个化合物对不同人肿瘤细胞均具有一定的抑制活性。

摘要： 目的研究长胜七的化学成分及其细胞毒活性。方法长胜七80%乙醇提取物采用硅胶、sephadexLH-20及RP-HPLC半制备进行分离纯化,通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR以及质谱鉴定化学结构,采用MTT法测定化合物的细胞毒活性。结果从长胜七中分离得到9个简单苯丙素类化合物,分别鉴定为:lawsorosemarinol(1),肉桂酸(2),erythro-7-methoxyguaiacylglycerol(3),erythro-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol(4),3-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-propan-1,2-diol(5),threo-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol(6),C-veratroylglycol(7),guaiacylglycerol(8),erythro-guaiacylglycerol(9),化合物3对HCT116细胞株具有细胞毒活性,IC_(50)值为(20.40±1.37)μM。结论化合物1~5,8,9首次从华中五味子植物中分离得到,化合物3具有细胞毒活性。

摘要： 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和反相高效液相制备色谱(HPLC),从黄连内生真菌Albifimbria viridis固体发酵物中分离纯化得到8个化合物,通过波谱学数据分析并结合其物理性质,将其鉴定为:Roridin J(1)、verrucarin A(2)、verrucarin L acetate(3)、Calcarisporin B1(4)、verrucarin J(5)、Isotrichoverrin A(6)、Isotrichoverrin B(7)、16-hydroxyroridin A(8).以上化合物均首次从Albifimbria viridis中分离得到.利用MTT法检测了化合物1~8对MCF-7和A549细胞的体外细胞毒活性,结果显示化合物4、6、8对MCF-7(人乳腺细胞)具有显著的抑制活性.

摘要： 为研究海洋来源真菌橘青霉(Penicillium citrinum)的次生代谢产物及其活性,采用凝胶柱层析、正相硅胶柱层析以及高效液相色谱等方法对菌株发酵液的乙酸乙酯提取物进行分离,通过LC-MS、NMR结构鉴定和文献数据对比等方法进行鉴定。结果表明,分离到的7个已知化合物经鉴定分别为3,3-二吲哚烷基-1,2-丙二醇(1)、robillafuran (2)、asperfuran A (3)、gamahorin (4)、7-羟基-5-甲氧基-4,6-二甲基-异苯并呋喃酮(5)、5-甲氧基-4,6-二甲基-7-氧-α-L-鼠李糖基-异苯并呋喃酮(6)、pestynol (7)。化合物1-7均为首次从青霉属真菌中分离得到,化合物1首次从真菌的次生代谢产物中发现。活性筛选结果表明,化合物7具有抗菌活性,化合物1和7对Marc-145细胞具有较强的细胞毒活性,半数致死浓度(Median Lethal Concentration, LC)值分别为57.397μg/mL和35.386μg/mL;在LPS诱导的BV-2细胞模型中,化合物2和4在浓度为12μg/mL时,BV-2细胞的存活率分别为76.77%和69.69%,具有潜在的抗神经炎症活性。

摘要： 目的：合欢皮为豆科合欢属植物合欢Albizzia julibrissin Durazz.的树皮,合欢皮的95％乙醇提取物在体外对多个肿瘤细胞系均显示良好的细胞毒活性,通过大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、高效液相色谱等色谱分离方法对该部位进行导向性分离,共分离得到8个齐墩果烷型三萜皂苷,包括4个新三萜皂苷和4个已知皂苷.通过核磁共振氢谱碳谱以及二维核磁共振谱、质谱、化学反应沟通等分析方法,鉴定了化学结构.该8个化合物对5种肿瘤细胞系均显示良好的细胞毒活性.

摘要： 目的：从红树林植物中分离真菌和放线菌,筛选代谢产物为生物碱并具有肿瘤细胞毒活性的“天才”菌株,分离鉴定其活性成分.方法:梯度稀释法分离菌株,对分得的真菌和放线菌分别进行静置和摇床培养,对其提取的代谢产物进行生物碱显色及MCF-7活性测试.结果：从4个红树林植物样品中分离纯化出10株放线菌及16株真菌,筛选出代谢产物为生物碱并具有MCF-7细胞毒活性的一株放线菌OUCMDZ-1716和一株真菌Phoma sp.OUCMDZ-1847.结论：红树林微生物具有巨大的开发潜力.

摘要： 本文应用现代色谱和光谱技术其细胞毒活性进行分离纯化和结构鉴定，提取分离乙醇提取物及其不同的极性部位。结果通光藤提取物具有一定的细胞毒作用，但13个化合物均不具显著的细胞毒活性。

摘要： 对一株采集南海的红树林内生真菌拟茎点霉(Phomopsis sp.HNY29-2B)的次级代谢产物进行系统的研究，从中分离得到了8个二聚体呫吨酮类化合物((phomoxanthones)，其中1-3为三个新的二聚体化合物，利用MS，1D和2D的NMR技术对这些化合物的结构进行鉴定。采用了MTT法考察了这个8个化合物的对人乳腺癌MDA-MB-435、结肠癌HCT-116、肺癌Calu-3和肝癌Huh7四种细胞株的生长抑制作用。结果表明，化合物4对四种肿瘤细胞有很强的细胞毒活性，5、7、8对MDA-MB-435、HCT-116和Calu-3三种癌细胞有较强的细胞毒活性。

摘要： 本文以唐古特铁线莲为研究对象,采用各种色谱技术对其醇提物正丁醇部位的化学成分进行分离纯化,得到16个单体化合物,它们的化学结构通过波谱技术和化学分析等手段鉴定为clematangoticosidesA-H(1-8)、cauloside D(9)、hederacholichiside F(10)、kizutasaponin K12(11)、clematoside S(12)、sapindosideB(13)、kalopanaxsaponin A(14)、koelreuteriasaponin A(15)和clematibetoside B(16),其中化合物1-8为新化合物.采用MTT方法,对所有化合物进行4株人肿瘤细胞(SGC-7901、HepG2、HL-60和U251MG)的细胞毒活性研究,结果显示,化合物12-15对所测细胞株均显示出细胞毒活性(IC50范围为1.88-27.20μM),而化合物4和6只对SGC-7901显示出微弱的细胞毒活性,IC50分别为24.14和21.35μmol/L.

摘要： 本文以斜萼草全草为研究对象,采用各种色谱分离手段对其化学成分进行纯化,得到12个单体化合物,这些化合物经过理化数据、波谱分析和化学方法等手段鉴定为斜萼草素D(1)、斜萼草素E(2)、13-表斜萼草素E(3)、β-谷甾醇(4)、豆甾醇(5)、阿克替苷(6)、campneoside I(7)、ilicifolioside A(8)、6-表-8-O-乙酰哈巴苷(9)、筋骨草苷(10)、radulignan(11)和flacoside A(12),其中化合物1-3为新化合物,化合物6-12为首次从该种分离得到.化合物1的绝对构型由单晶衍射确定,化合物2和3的绝对构型通过化学反应生成已知化合物后反向推断确定.细胞毒活性评价结果显示,化合物3对A549和MCF-7表现出微弱的细胞毒活性,IC50分别为22.4和47.3μmol/L.

摘要： 海洋微生物来源天然产物的研究一直引起广泛的关注,而深海环境由于低温、低光照、高压力等特点,造就了深海微生物独特的生物合成途径,从而为发现结构新颖,活性独特的天然产物创造可能[1].随着采样技术和微生物培养技术的进步,深海来源真菌的研究成为药物发现和发展的前言领域[2-3],目前已分离到约180个活性天然产物[4],然而相比于现有的约24000个海洋天然产物来讲[5],深海真菌还具有巨大的挖掘潜能.本课题组近年来致力于深海来源真菌的研究,寻找结构新颖的活性化合物[6-7]。在对一株分离自印度洋5725m深处海泥的真菌Penicillium fellutanum HDN14-323进行次级代谢产物的初步研究时发现其粗浸膏具有一定的细胞毒活性且HPLC-UV显示该菌株次级代谢产物丰富且呈现系列吸收。从目标菌株HDN14-323发酵粗提物中发现了7个结构新颖的二聚和三聚的6-甲基水杨醇类化合物1-7以及4个已知的生合成相关的化合物8-11，其中化合物2为首次从微生物分离得到的具有C-7/C-4'和 C-7'/O/C-7''连接方式的化合物。抗肿瘤活性评价结果显示该类化合物对HeLa、HL-60、HCT-116等细胞表现出了一定的细胞毒活性且化合物4对HeLa细胞具有较好的细胞毒活性（IC50 = 9.3 μM）。上述研究工作表明，深海真菌物种丰富、代谢产物结构多样、活性显著，是药物及其先导结构研究的重要资源，具有较高的研究价值。

摘要： 药用植物内生菌代谢产物具有结构丰富、活性多样等特点,是寻找活性成分的理想资源.从健康斑茅的茎、叶等组织中分离获得56株内生真菌,其中14株有一定的细胞毒活性.利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、HPLC高效液相色谱等手段,通过大米培养基固体发酵对一株桔青霉菌的次级代谢产物的乙酸乙酯提取物进行初步化学成分研究.通过理化性质、波谱分析方法鉴定了以上化合物结构,数据和文献报道一致.

摘要： 幽门螺旋杆菌一直是胃肠病领域的热门研究课题，金属离子因其毒性大，刺激性强，难吸收等缺点而不能直接应用于临床，配合物可以整合药物分子和金属离子间的协同效应，弥补有机小分子和金属离子单独作为抑制剂时存在的缺憾，可以作为潜在的抗幽门螺旋杆菌药物。本研究以原儿茶酸为原料,合成了衍生物1,4-苯并二噁烷-6-羧酸.以1,4-苯并二噁烷-6-羧酸为主配体、邻菲罗啉为第二配体合成了两个金属配合物,分别培养出了其单晶.利用单晶X射线衍射仪、元素分析和红外光谱对其结构进行了表征,并测试了两个配合物抑制脲酶活性和抑制细胞增殖活性.结果表明:配合物1为单核结构,配合物2为双核结构,这两个配合物均为单斜晶系C2/c空间群.配合物1和2抑制脲酶的IC50值分别为0.14和0.065μM,均优于阳性对照乙酰氧肟酸(IC50值为12.5μM),即两种配合物均具有很强的抑制脲酶活性.这两种配合物均对肺癌细胞株A549、结肠癌细胞SW620和小鼠成纤维细胞L929表现出强的细胞毒活性,且其细胞毒活性与阳性对照顺铂相当或优于阳性对照顺铂.

摘要： 目的:研究临床常用中药益母草的化学成分.rn 方法:采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI以及反相C18柱色谱等方法进行分离,运用波谱数据分析鉴定化合物的结构;通过MTT法对分离鉴定的单体化合物进行细胞毒活性筛选.rn 结果:从益母草的乙酸乙酯部位中分离鉴定了12个芳香族化合物:佛手柑内酯(1)、meransin hydrate(2)、橙皮油内酯烯酸(3)、异欧前胡素(4)、欧芹酚甲醚(5)、(-)-戈米辛K1(6)、戈米辛J(7)、芝麻素(8)、4.羟基苯甲基乙醚(9)、对羟基苯甲酸乙酯(10)、对羟基苯甲醛(11)和香草醛(12).rn 结论:化合物1-12均为首次从该属中分离得到,且首次从唇形科植物中发现了联苯环辛烯型木脂素.化合物11对急性髓系白血病细胞株MV4-11具有一定的细胞毒活性.

摘要： 本发明涉及一种新的由幽门螺旋杆菌生成的细胞毒蛋白质(M毒素、粘膜层破坏毒素)及该细胞毒蛋白的应用。本发明提供了由幽门螺旋杆菌产生的细胞毒蛋白(M毒素)、部分肽和含有该细胞毒蛋白的抗肿瘤试剂。该蛋白通过培养用含有编码该细胞毒蛋白的DNA的重组载体转化的转化体而获得。本发明进一步提供了该蛋白的应用。

摘要： 本发明涉及一种新的由幽门螺旋杆菌生成的细胞毒蛋白质(M毒素、粘膜层破坏毒素)及该细胞毒蛋白的应用。本发明提供了由幽门螺旋杆菌产生的细胞毒蛋白(M毒素)、部分肽和含有该细胞毒蛋白的抗肿瘤试剂。该蛋白通过培养用含有编码该细胞毒蛋白的DNA的重组载体转化的转化体而获得。本发明进一步提供了该蛋白的应用。

摘要： 本发明公开了一种用于肿瘤细胞免疫治疗的高细胞毒活性CIK细胞，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×106/mL细胞，加入含500～2000IU/mLγ干扰素和80～120ng/mL该化合物的完全培养基，开始诱导培养；完全培养基包括含体积百分比为10％FBS的RPMI？1640细胞培养液；(4)步骤(3)的细胞培养20～28小时后，加入50～1000ng/mL抗人CD3单克隆抗体和500～2000IU/mL重组人IL-2，继续诱导培养，每隔2～3天传代培养一次，诱导培养时间为13～21天，获得CIK细胞。该CIK细胞可用于肿瘤细胞免疫治疗。

摘要： 本发明涉及一种高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，包括以下步骤：（1）将外周血单个核细胞分选去除CD4+CD25+Treg细胞，得到CIK前期细胞；（2）将CIK前期细胞置于含有100ng/ml PHA、100ng/ml IL-6、10ng/ml PGE2的细胞培养液中培养24小时；（3）转移至经1ug/ml CD3单抗包被的细胞培养瓶中，加入1000U/ml IFN-γ培养48小时；（4）加入1000U/ml IL-2以及100ng/ml IL-1α培养4天；（5）加入1ug/ml胰岛素继续培养7-14天。还提供了相关的CIK细胞及应用、抑制外周血单个核细胞向CD4+CD25+Treg细胞分化的方法及促进CIK细胞增殖的方法。本发明的CIK细胞制备方法设计巧妙，制备得到的肿瘤杀伤细胞-CIK细胞具有较强的增殖能力，较高的毒活性，具有更佳的肿瘤杀伤效率，提高临床疗效，适于大规模推广应用。

摘要： 本发明公开了一种高细胞毒活性CIK细胞及在肿瘤细胞免疫治疗中的应用，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10

摘要： 本发明公开了一种肿瘤细胞免疫治疗用高细胞毒活性CIK细胞，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10

摘要： 本发明公开了一种高细胞毒活性CIK细胞及肿瘤细胞免疫治疗用途，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10

摘要： 本发明公开了肿瘤细胞免疫治疗用的高细胞毒活性CIK细胞，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10

摘要： 本发明公开了一种用于肿瘤细胞免疫治疗的高细胞毒活性CIK细胞，该CIK细胞通过如下步骤制备：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×106/mL细胞，加入含500～2000IU/mLγ干扰素和80～120ng/mL该化合物的完全培养基，开始诱导培养；完全培养基包括含体积百分比为10％FBS的RPMI？1640细胞培养液；(4)步骤(3)的细胞培养20～28小时后，加入50～1000ng/mL抗人CD3单克隆抗体和500～2000IU/mL重组人IL-2，继续诱导培养，每隔2～3天传代培养一次，诱导培养时间为13～21天，获得CIK细胞。该CIK细胞可用于肿瘤细胞免疫治疗。

摘要： 本发明涉及一种高增殖能力、高细胞毒活性、高存活率的CIK细胞制备方法，包括以下步骤：（1）将外周血单个核细胞分选去除CD4+CD25+Treg细胞，得到CIK前期细胞；（2）将CIK前期细胞置于含有100ng/ml PHA、100ng/ml IL-6、10ng/ml PGE2的细胞培养液中培养24小时；（3）转移至经1ug/ml CD3单抗包被的细胞培养瓶中，加入1000U/ml IFN-γ培养48小时；（4）加入1000U/ml IL-2以及100ng/ml IL-1α培养4天；（5）加入1ug/ml胰岛素继续培养7-14天。还提供了相关的CIK细胞及应用、抑制外周血单个核细胞向CD4+CD25+Treg细胞分化的方法及促进CIK细胞增殖的方法。本发明的CIK细胞制备方法设计巧妙，制备得到的肿瘤杀伤细胞-CIK细胞具有较强的增殖能力，较高的毒活性，具有更佳的肿瘤杀伤效率，提高临床疗效，适于大规模推广应用。