细胞培养技术

摘要： 目的:探究分离提取子宫内膜异位症(EMs)相关巨噬细胞的方法。方法:免疫组织化学法检测正常子宫内膜切片以及EMs切片中CD68和CD163的表达。收集3例经腹腔镜确诊为EMs患者病灶,通过机械法结合IV型胶原酶消化法分离EMs相关巨噬细胞,并利用流式细胞术检测细胞CD11b、CD163、CD80的表达情况。结果:EMs组织中可见2型巨噬细胞高表达,提取的EMs原代巨噬细胞具备巨噬细胞的形态特征,其中CD11b和CD163双阳性比例为6.46%,且未见CD80阳性细胞表达。结论:本研究采用的方法可有效提取EMs组织相关巨噬细胞,提高了纯度,对进一步研究EMs相关巨噬细胞特性及其生物学行为具有重要价值。

摘要： 目的通过自然杀伤(NK)细胞体外培养和转录组学测序(RNA-seq)技术研究人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),应用NK细胞培养法进行培养。采用流式细胞术、ELISA法和磁性细胞分选技术分析体外培养扩增不同阶段的NK细胞。获得纯化后的NK细胞进行RNA-seq检测,分析人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。结果体外培养14 d后,NK细胞(CD3-CD56+)的比例达到90%以上。第10、14天NK细胞的杀伤活性均较第0天明显增强,且随着效靶比从5∶1、10∶1到20∶1,各组NK细胞对K562细胞的杀伤活性均逐步提高(F=124.40~5512.00,P<0.05)。培养至第14天的NK细胞IFN-γ的分泌量显著高于第0、10天(q=67.17、7.75,P<0.05)。RNA-seq分析结果显示,第10、14天NK细胞与第0天NK细胞相比差异表达基因(DEGs)均较多,且第10天DEGs多于第14天。GO功能和KEGG通路富集分析显示这些DEGs主要与炎症反应、免疫反应、细胞分裂和增殖相关,而且显著富集在细胞周期、成骨细胞分化、造血细胞调控、NF-Kappa B等信号通路。结论本研究发现CD16抗体联合5种细胞因子的培养方法可以有效诱导PBMC成为NK细胞,为NK细胞免疫治疗提供了理论基础和实验依据。

摘要： 细胞培养指的是经过酶、机械或化学的方法将组织离散成单个细胞,模拟动物体内环境进行培养并促进其生长发育的方法。基于鱼类模型的潜在应用,开发了包括体外细胞培养在内的多种技术。20世纪生物技术兴起,体外细胞培养逐渐渗透至各学科应用,如免疫学、药理学、毒理学、遗传及组织再生和移植等。体外培养细胞具有模仿宿主细胞遗传同质性的优点,实验过程中可一定程度上减少体内的反应变异性,且成本低、重复性好、道德约束小。鱼类细胞培养技术发展于20世纪60年代,最早应用于病毒分离,细胞可从不同器官组织中获得。虽然鱼类细胞培养技术研究晚于哺乳动物,但从长远来看对于鱼类细胞的深入研究对于理论研究和实际应用都具有深远意义和广阔开发前景。简要讨论了鱼类细胞培养的历史进程、应用现状以及细胞培养技术,为未来鱼类细胞培养技术研究提供参考。

摘要： 目的:探讨慢病毒介导补体C3沉默载体转染人B淋巴细胞Raji-成骨细胞系MG63共培养体系对共培养体系成骨能力的影响及其作用机制。方法:构建慢病毒补体C3沉默载体,转染人B淋巴细胞Raji后建立体外Raji-成骨细胞系MG63共培养体系,分为空白对照组(不做特殊处理)、补体C3沉默组(慢病毒补体C3沉默载体转染共培养体系)与模型组(慢病毒空载载体转染共培养体系)。培养24 h后,采用反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法及Western-Blot法检测各组补体C3表达水平;各组分别培养0、3、6、12、24、48、72 h后采用CCK-8检测各组成骨细胞系MG63增殖能力;培养24 h后分别采用流式细胞术检测各组成骨细胞系MG63的细胞凋亡情况,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测盒检测各组MG63细胞AKP活力,采用Western-Blot法检测各组成骨细胞系MG63的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白表达水平。结果:RT-PCR法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组;Western-Blot法检测结果显示补体C3沉默组C3表达水平低于空白对照组和模型组;CCK-8检测结果提示培养3、6 h后补体C3沉默组MG63增殖能力与空白对照组、模型组比较差异无统计学意义;培养12 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组;培养24、48、72 h后补体C3沉默组成骨细胞系MG63增殖能力高于空白对照组和模型组;流式细胞术检测结果提示补体C3沉默组成骨细胞系MG63的细胞凋亡水平低于空白对照组和模型组;AKP检测盒检测结果提示补体C3沉默组AKP活力高于空白对照组和模型组;Western-Blot法检测结果提示补体C3沉默组OPG蛋白表达水平高于空白对照组和模型组。结论:补体C3的沉默能够增强成骨细胞系MG63的骨形成能力,并且发挥这种能力需要时间的累积。补体C3可能通过改变OPG/RANKL/RANK轴来影响成骨能力。

摘要： 神经系统疾病严重威胁人类生命健康,降低了患者的生活质量。神经细胞三维培养技术,可以模拟脑部高度复杂化的三维神经网络结构,清晰展现神经细胞三维空间的生长机制和特点,可以用于揭示神经系统疾病的发生发展过程,也可以用于某些特异性药物的研发。本文对目前神经细胞三维培养技术的研究现状进行了总结与展望。

摘要： 目的建立可在体外培养的人滋养层干细胞系(hTSCs),为研究胎盘的发育机制提供新的模型。[HTH]方法[HTSS]取临沂市妇幼保健院生殖医学科患者捐赠的发育正常的5~6 d囊胚,利用延时培养技术分离获取hTSCs,进行细胞核型分析,利用免疫荧光技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测hTSCs标记物的表达,并对hTSCs的侵袭能力、分化能力以及内分泌功能进行检测。[HTH]结果[HTSS]本实验成功建立4株hTSCs,其均具有正常细胞核型。免疫荧光技术检测显示,第8代hTSCs中转录因子活化蛋白2C(TFAP2C)、细胞角蛋白7(CK7)、转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)稳定表达;RT-qPCR检测结果显示,第8、16代hTSCs中CK 7、GATA 3、TFAP 2 C、TEAD 4基因的相对表达量无显著性差异(P>0.05);分化组第2、4、6天穿过trasnswell微孔的细胞数量均多于未分化组(F=53.31~234.55,P<0.05);第4、6天分化组穿过trasnswell微孔的细胞表达GCM1的比例均高于未分化组(F=50.25,131.13,P<0.05);分化组中CK 7、SDC-1、β-hCG和ITGA 5基因的相对表达量均显著高于未分化组(t=-6.78~-2.51,P<0.05);分化组第2、4、6天培养基中雌二醇、孕酮浓度均高于未分化组(F=25.06~225.62,P<0.05)。[HTH]结论[HTSS]本研究成功分离获取的hTSCs具有正常核型,均表达hTSCs特异标记物,其侵袭能力、分化能力及分泌功能等与人类早期胎盘滋养层细胞相似。这将为进一步研究人类滋养层细胞的发育和功能提供有力的工具。

摘要： 目的 探讨孕中期孕妇羊水细胞的培养及染色体核型在产前诊断中的应用价值.方法 纳入本院2018年6月至2019年12月因存在高危因素就诊的孕中期孕妇178例.于B超引导下行羊膜腔穿刺术,每例抽取羊水20 mL,经羊水细胞培养及染色体核型分析,进行产前诊断.结果 178例羊水细胞培养成功178例,成功率为100％;检出异常染色体核型16例,检出率为9.0％,其中数目异常11例占68.8％,结构异常5例占31.2％.结论 羊水细胞培养及染色体核型分析安全可靠,可有效避免出生缺陷的发生.

摘要： 细胞培养技术是细胞生物学研究中的重要技术。虚拟仿真实验教学依托多媒体和人机交互等技术,构建高度仿真的虚拟实验环境和实验对象,可使学生自主进行实验,是一种有利于实现资源共享、全新开放、信息化的教学模式。因此,建立细胞培养虚拟实验平台,可促进学生进行自主学习、提高自主创新能力。细胞培养技术广泛应用于多个学科领域的科研工作中,是生命科学工作中必不可少的实验技能。

摘要： 为了让学生更好的掌握细胞培养技术,本研究针对动物学专业研究生专业特点和培养目标,以内蒙古大学“细胞工程综合实验”实验课的研究生为研究对象,在教学内容、教学方式和考核评价等方面做了改革。实验以基本实验操作和应用性实验内容为主;考核从技术方面和实验设计方式多元化进行。从教学效果来看,课堂出勤率高;经过实验课培训的研究生动手操作能力、创新思维和科学研究能力得到不同程度的提升,团队协作精神得到锻炼,文献查阅和科研写作能力得到加强。学生能更快地融入到各自课题组的研究项目中去。

摘要： 目的:探索五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)是否可以降低PM2.5对人早孕胎盘绒毛膜外滋养层(human trophoblast HTR-8/SVneo,HTR)细胞增殖的抑制作用.方法:体外实验以HTR细胞为载体,利用MTS细胞增殖实验检测不同浓度的细颗粒物(PM2.5)、Sch B单独给药以及PM2.5联合Sch B给药对HTR细胞增殖的影响.结果:10～1000μg/mL浓度范围内的PM2.5均抑制了HTR细胞的增殖(P<0.01),其中150μg/mL浓度的PM2.5抑制率达到21.97％;0.1～5μmol/L浓度Sch B均降低了PM2.5的抑制HTR细胞增殖作用,且在0.1～2μmol/L浓度范围内其降低PM2.5抑制HTR细胞增殖的作用随着Sch B浓度增加而增大(P<0.01),其中2μmol/L的Sch B对HTR细胞的保护作用最强,保护率达到14.07％.结论:Sch B可以有效降低PM2.5对HTR细胞增殖的抑制作用,具有体内潜在保护人类滋养细胞的作用.

摘要： 细胞培养已广泛应用于教学、科研、临床实验研究及生物制药等各项领域中,细胞培养技术是医学生开展科学实验必须掌握的最基本的一项技术.细胞培养过程中最常见的污染有细菌污染、支原体污染、真菌污染等等.在科学实验中如果细胞污染经常发生,会给科研工作者的信心造成沉重的打击,导致实验缓慢或失败.本文浅谈肿瘤细胞培养过程中污染防治措施,要培养好一种细胞，除了选适合细胞生长的良好培养环境、细胞本身的质量和培养基外。在细胞培养过程中，细胞培养实验技术人员在思想上必须建立严格的无菌观念;严格规范的操作程序和耐心，把握好每一个细节，才能培养出高质量的细胞，用于教学、科研和临床实验中。

摘要： 本试验采用细胞培养技术研究共轭亚油酸预防肿瘤细胞转移的可能途径以探讨新的抗肿瘤药物机制.

摘要： 本发明提供细胞培养装置、细胞培养长期观察装置、细胞长期培养方法、细胞培养长期观察方法，不会产生随着培养细胞的老化而产生的生理状态的变化，而能够在均匀的环境条件下连续地培养、观察细胞，还能够追踪特定细胞的历史(谱系)。细胞培养装置具有细胞培养基板、半透膜、培养液的供给机构，细胞培养基板在表面具有用于保持培养细胞的细的培养用槽和用于将在该培养用槽内保持培养的细胞排出的粗的排出用槽，并且，所述培养用槽的两端与排出用槽连接，排出用槽比培养用槽粗且比培养用槽深，半透膜用于覆盖细胞培养基板的培养用槽以及排出用槽，培养液的供给机构能够对由半透膜覆盖的细胞培养基板连续地供给培养液。

摘要： 本发明提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。本发明的细胞培养用支架材料为含有合成树脂的细胞培养用支架材料，其中，所述合成树脂的氮含量为0.1质量％以上10质量％以下。

摘要： 本发明提供一种降低污染的风险，并且也较好地在同一容器内效率良好地对细胞进行培养、分化诱导等处理的容器。此外，提供一种能够确保广范围且平坦的培养面等的细胞培养容器。容器的制造方法包含：将袋状膜容器载置于形成有凹部的载置台，向所载置的袋状膜容器的内部导入流体，一面对载置台及按压构件中的至少一个加热，一面利用按压构件对载置于载置台的袋状膜容器加压。另一方面，细胞培养容器包含：第1容器壁，其具有透气性，为底面，由平面状的膜构成；及第2容器壁，其具有鼓出形状，该鼓出形状接触于该第1容器壁的周缘部并且相对于第1容器壁而突出；第1容器壁至少于与埠口接触的区域以外呈平面状。

摘要： 本发明提供一种可以在减轻操作者的劳动的同时实现与细胞的培养状况对应的恰当的培养的细胞培养装置。该装置具有：用于增殖细胞的培养袋(18)；为了增殖而用诱导因子刺激细胞的细胞接种盒(19)(或作为抗体刺激及增殖用培养容器的培养袋(242))；储存向这些培养袋(18)、细胞接种盒(19)供给的培养基的培养基盒(20)；取得细胞接种盒内的细胞的图像的CCD照相机(88)；根据由该CCD照相机取得的细胞的图像判定该细胞的培养状况(细胞的增殖可能性和增殖能力)并基于该判定执行培养操作的图像处理用计算机及运转控制用计算机。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 提供一种细胞的培养方法，在细胞培养器内向细胞导入因子，并在与上述细胞培养器相同的细胞培养器内培养导入了上述因子的细胞。另外，提供一种单核细胞的回收方法，其包括：对血液进行处理，制作至少部分地除去了红细胞而得到的处理血液；对处理血液进行稀释；使稀释后的处理血液中所含的单核细胞沉降；除去稀释后的处理血液的上清液；以及回收单核细胞。

摘要： 本发明提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。本发明的细胞培养用支架材料中，表面自由能的色散成分γd为24.5mJ/m2以上并且不足45.0mJ/m2，表面自由能的偶极成分γp为1.0mJ/m2以上并且不足20.0mJ/m2。

摘要： 本发明提供细胞培养装置、细胞培养长期观察装置、细胞长期培养方法、细胞培养长期观察方法，不会产生随着培养细胞的老化而产生的生理状态的变化，而能够在均匀的环境条件下连续地培养、观察细胞，还能够追踪特定细胞的历史(谱系)。细胞培养装置具有细胞培养基板、半透膜、培养液的供给机构，细胞培养基板在表面具有用于保持培养细胞的细的培养用槽和用于将在该培养用槽内保持培养的细胞排出的粗的排出用槽，并且，所述培养用槽的两端与排出用槽连接，排出用槽比培养用槽粗且比培养用槽深，半透膜用于覆盖细胞培养基板的培养用槽以及排出用槽，培养液的供给机构能够对由半透膜覆盖的细胞培养基板连续地供给培养液。

摘要： 本发明的目的在于提供一种耐培养液性良好、细胞毒性低，且所培养细胞的黏着率和细胞存活率高、热稳定性良好，而且难以吸收紫外线的细胞培养基质。在包含由无机材料组成的基板的细胞培养基质中，细胞培养基质在培养面上具有多个凹凸结构，在依据JISB0601以及JISR1683并使用原子力显微镜测量凹凸结构时(测量区域为1μm四方，低通轮廓曲线滤波器的截断值为1nm，高通轮廓曲线滤波器的截断值为170nm)，至少在一个方向上的凹凸结构的轮廓曲线元素的平均长度是1～170nm(平均线是在根据最小二乘法将曲线修正为直线时，与其直线平行，且表示轮廓曲线中高度的累计相对频率分布为50％的线，其中，曲线表示被所述高通轮廓曲线滤波器阻断的长波长成分)。

摘要： 本发明涉及使用哺乳动物细胞以在哺乳动物细胞中高效生产靶材料的细胞培养基、使用所述细胞培养基的细胞培养方法以及生产所述靶材料的方法，并且更特别地涉及在培养物中包含浓度为30μM或更高的Zn离子、其盐或螯合化合物的细胞培养基、使用所述细胞培养基的细胞培养方法，以及生产靶材料的方法。根据本发明，可提供用于通过使用哺乳动物细胞来生产重组蛋白的细胞培养基，其在提高抗体产量方面可取得优异的效果而不表现出任何细胞生长抑制作用。