核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

摘要： 背景:对于脑缺血/再灌注损伤目前尚无有效的治疗方法,缓解脑缺血/再灌注损伤级联损伤对于治疗方法的探索至关重要.电针基于传统针灸和电疗法,可有效缓解缺血性脑卒中导致的神经功能损伤症状.目的:基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1通路,探讨电针对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用.方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组,每组12只,后3组应用线栓法制备脑缺血再灌注模型.半胱天冬氨酸蛋白酶1抑制剂用Z-YVAD-FMK干预,穴位选取"合谷""尺泽""三阴交""足三里".采用神经行为学评分评定神经功能症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法观察脑组织梗死情况,电镜观察神经元焦亡,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达,免疫荧光染色观察小胶质细胞水平,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素1β、白细胞介素18及肿瘤坏死因子α表达水平.结果与结论:①与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经功能缺损评分、脑组织梗死体积减少(P均<0.05);②与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经元焦亡减轻;③与模型组比较,电针组和抑制剂组的小胶质细胞减少,白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平降低(P均<0.05);④与模型组比较,电针组和抑制剂组核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达水平降低(P均<0.05);⑤表明电针可通过减少小胶质细胞水平、减少炎症反应、下调核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达、减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经元焦亡,发挥神经保护作用.

摘要： 背景:对于脑缺血/再灌注损伤目前尚无有效的治疗方法,缓解脑缺血/再灌注损伤级联损伤对于治疗方法的探索至关重要。电针基于传统针灸和电疗法,可有效缓解缺血性脑卒中导致的神经功能损伤症状。目的:基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1通路,探讨电针对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组,每组12只,后3组应用线栓法制备脑缺血再灌注模型。半胱天冬氨酸蛋白酶1抑制剂用Z-YVAD-FMK干预,穴位选取“合谷”“尺泽”“三阴交”“足三里”。采用神经行为学评分评定神经功能症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法观察脑组织梗死情况,电镜观察神经元焦亡,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达,免疫荧光染色观察小胶质细胞水平,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素1β、白细胞介素18及肿瘤坏死因子α表达水平。结果与结论:①与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经功能缺损评分、脑组织梗死体积减少(P均<0.05);②与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经元焦亡减轻;③与模型组比较,电针组和抑制剂组的小胶质细胞减少,白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平降低(P均<0.05);④与模型组比较,电针组和抑制剂组核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达水平降低(P均<0.05);⑤表明电针可通过减少小胶质细胞水平、减少炎症反应、下调核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达、减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经元焦亡,发挥神经保护作用。

摘要： 动脉粥样硬化性心血管疾病一直以来都是威胁人类身体健康的主要疾病之一,而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的激活是动脉粥样硬化发生发展过程中的重要环节。钠—葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂作为新型降糖药物,被发现在心血管疾病,尤其是动脉粥样硬化性心血管疾病中发挥保护作用,其可能通过减少氧化应激、抑制核因子κB信号通路、激活细胞自噬等机制对NLRP3炎症小体的激活产生抑制,从而减轻内皮炎症损伤、抑制动脉粥样硬化斑块的形成。

摘要： 目的:探讨解毒护肝方对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法:60只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组以及解毒护肝方低、中、高剂量组。APAP造模同时,分别灌胃给予相应药物治疗,连续14 d。实验结束后,采集血清和肝组织,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)的活性或含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝脏病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肝脏中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)的基因蛋白表达水平。结果:与正常组比,模型组小鼠血清AST、ALT、DBIL、TBIL、IL-1β和IL-18的活性含量均显著升高(P<0.01),肝脏中NLRP3和caspase-1基因蛋白表达明显上调(P<0.01),肝细胞内可见嗜酸性变和炎性细胞浸润;与模型组比,解毒护肝方各剂量组能明显降低血清AST、ALT、DBIL、IL-1β和IL-18的活性或含量以及肝脏中NLRP3和caspase-1基因蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05),改善肝脏病理损伤。结论:解毒护肝方可有效防治APAP诱导的小鼠ALI,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关,为临床治疗ALI提供了用药实验依据。

摘要： 目的:探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化Gasdermin D(GSDMD)蛋白介导的细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用及其机制。方法:分别收集40例急性痛风性关节炎患者(试验组)和40例健康体检者(对照组);采用血常规检测仪和全自动生化分析仪检测两组血清中生化指标(肾功、血脂)及白细胞计数(WBC)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)等炎性指标的含量。采用免疫印迹法检测法(Western blot)分别检测两组外周血单个核细胞中NLRP3、GSDMD、白介素1β(IL-1β)蛋白的表达量。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组血浆中IL-1β和白介素18(IL-18)的表达量。结果:与对照组相比,试验组中WBC、ESR、CRP水平较高,差异具有统计学意义(均P<0.05);试验组细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、IL-1β及IL-18表达显著增加(均P<0.05);试验组血尿酸水平、NLRP3、GSDMD与炎性因子(IL-1β及IL-18)表达量呈线性正相关(均P<0.05)。结论:NLRP3可能通过激活的GSDMD蛋白介导的细胞焦亡引起IL-1β等炎症因子的释放,参与急性痛风性关节炎的免疫炎性反应。

摘要： 目的探讨血必净联合乌司他丁治疗脓毒症急性肺损伤的临床疗效,以及对患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体表达水平的影响。方法选取医院2017年1月至2020年10月收治的脓毒症急性肺损伤患者120例,按治疗方法的不同分为对照组和观察组,各60例。两组患者均予常规治疗及注射用乌司他丁静脉滴注,观察组患者加用血必净注射液静脉滴注,两组均治疗7 d。结果与对照组比较,观察组患者治疗后的人外周血单核细胞中NLRP3和caspase-1 mRNA水平及下游炎性指标(白细胞介素1β、白细胞介素18和内毒素)水平,肺损伤预测评分和24 h内急性生理与慢性健康状况评分,二氧化碳分压、乳酸水平及肺泡-动脉氧分压差显著降低,氧合指数显著升高(P0.05)。结论血必净联合乌司他丁治疗脓毒症急性肺损伤,可降低炎性因子水平,改善血气指标,减轻疾病严程度,其机制可能与抑制NLRP3炎性小体的表达及下游炎性通路的激活有关。

摘要： 目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。

摘要： 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及微小RNA-22-3p(miR-22-3p)在儿童结肠息肉组织中的表达及对儿童结肠息肉疾病进展的影响。方法选取结肠息肉患儿98例,其中幼年性息肉患儿52例、腺瘤性息肉患儿46例,另选取相对应患儿正常结肠组织作为对照;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-22-3p相对表达量,免疫组化法检测NLRP3表达,卡方检验分析不同临床病理特征结肠息肉组织中NLRP3及miR-22-3p表达;单因素及多因素logistic回归分析影响儿童结肠息肉疾病进展的因素。结果正常结肠组织、幼年性息肉组织、腺瘤性息肉组织中NLRP3阳性表达率依次升高,miR-22-3p相对表达量依次降低,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);腺瘤性息肉、息肉多发、息肉直径≥2.5 cm的结肠息肉患儿中NLRP3阳性表达、miR-22-3p低表达的比例升高(P<0.05);NLRP3是影响结肠息肉发展为腺瘤性的独立危险因素(P<0.05),miR-22-3p是影响结肠息肉发展为腺瘤性的保护因素(P<0.05)。结论结肠息肉组织中NLRP3高表达、miR-22-3p低表达,且二者与结肠息肉疾病进展有关。

摘要： 抑郁症是常见的精神障碍性疾病之一,其会给患者和家庭带来沉重的经济负担和思想负担[1]。随着人类生活节奏的加快,来自各个方面的精神压力将会不断增加,促使部分人群出现不同程度的抑郁样行为,如心境低落、思维迟缓、意志活动减退等。如果不加以控制外界施加因素,部分人群就会出现抑郁症,其发病机制尚不清楚。

摘要： 目的:分析具核梭杆菌(Fn)诱导炎症小体NLRP3表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)患者临床病理特征及5 a生存期的关系。方法:将ESCC细胞KYSE30及KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48、72 h),采用CCK-8法检测各组细胞的顺铂(CDDP)与紫杉醇(PTX)24 h药物半数抑制浓度(IC50),采用Western blot及qRT-PCR法检测各组细胞中NLRP3蛋白及mRNA的表达情况。取213例ESCC及相应癌旁正常组织,采用RNAscope法检测Fn感染情况,采用免疫组化法检测NLRP3蛋白的表达情况。结果:与Fn未感染组相比,Fn感染组(12、24、48及72 h)KYSE30及KYSE150细胞的CDDP与PTX 24 h药物IC50增高,NLRP3蛋白及mRNA相对表达量增高(P<0.05)。与癌旁正常组织相比,ESCC组织中Fn感染率、NLRP3相对表达量增加(P<0.05)。ESCC组织中NLRP3表达与Fn感染具有一致性(Kappa=0.848,P=0.001)。Fn诱导NLRP3表达患者中男性、吸烟、饮酒者居多,肿瘤细胞大多为低分化,肿瘤浸润程度较深,淋巴结转移增加且临床分期多为Ⅲ/Ⅳ期,Fn+NLRP3阳性组患者中位生存时间缩短(P<0.05)。结论:Fn感染可诱导ESCC组织中NLRP3表达,降低肿瘤细胞对CDDP与PTX的敏感性,缩短ESCC患者生存期。

摘要： 本发明公开了一种核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白在治疗寨卡病毒感染药物中的应用，步骤：A、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3抗寨卡病毒活性的评价；B、从THP‑1细胞中提取的总mRNA为模板，通过反转录PCR扩增得到总的cDNA，通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切、连接将NLRP3基因克隆到载体pGEX‑6p‑1的pTAC启动子下，获得表达NLRP3的菌株。C、挑取上述菌株单菌落，接入含有氨苄霉素的LB液体培养基中，进行NLRP3的表达，并用亲和层析纯化、浓缩，得到NLRP3冻存液；D、将蛋白加入到细胞中，检测ZIKV NS5的mRNA水平和蛋白水平。NLRP3是人体内组成性表达的细胞因子，生理浓度下对人体没有毒副作用，NLRP3的抗病毒作用机制是通过改变细胞内的信号来抑制病毒复制，抗病毒的机制多样化，不易使病毒产生耐药性。

摘要： 本发明公开了一种采用二重焦磷酸测序法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3的SNP试剂盒及方法。所述试剂盒对NLRP3SNP进行检测，具体是指rs1539019C/A、rs10754558C/G单核苷酸多态性。试剂盒包括：上、下游引物、二重反应体系和条件。本发明所提供的试剂盒及检测方法对NLRP3SNP分型成功率为100%，可以实现高通量、低成本、高效、准确的对NLRP3SNP进行检测。

摘要： 本发明公开了一种式I所示的能够抑制炎症小体核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、抑制白介素‑1β(IL‑1β)与肿瘤坏死因子‑α(TNF‑α)分泌的化合物及其制备方法。ELISA实验表明，此类化合物可以显著抑制NLRP3的活性，降低NLRP3下游炎症因子IL‑1β的表达。进一步的实验表明部分化合物对IL‑1β/TNF‑α具有选择性抑制作用。式I化合物有望成为一类新型的抗炎药物以及自身免疫疾病治疗药物。

摘要： 本发明公开了一种核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白在治疗寨卡病毒感染药物中的应用，步骤：A、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3抗寨卡病毒活性的评价；B、从THP‑1细胞中提取的总mRNA为模板，通过反转录PCR扩增得到总的cDNA，通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切、连接将NLRP3基因克隆到载体pGEX‑6p‑1的pTAC启动子下，获得表达NLRP3的菌株。C、挑取上述菌株单菌落，接入含有氨苄霉素的LB液体培养基中，进行NLRP3的表达，并用亲和层析纯化、浓缩，得到NLRP3冻存液；D、将蛋白加入到细胞中，检测ZIKV NS5的mRNA水平和蛋白水平。NLRP3是人体内组成性表达的细胞因子，生理浓度下对人体没有毒副作用，NLRP3的抗病毒作用机制是通过改变细胞内的信号来抑制病毒复制，抗病毒的机制多样化，不易使病毒产生耐药性。

摘要： 本发明公开了一种核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白在治疗EV71感染药物中的应用，步骤是：A、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3抗病毒活性的评价；B、以从THP‑1细胞中提取的总mRNA为模板，通过反转录PCR扩增得到总的cDNA，再以总的cDNA为模板，用引物扩增得到NLRP3基因片段；C、挑取菌株BL21‑pGEX‑6p‑1‑NLRP3单菌落，接入含有氨苄霉素的LB液体培养基中，摇床上摇菌过夜；转接菌液至含20mL培养基的50mL摇瓶中，摇床上摇菌表达NLRP3蛋白，用亲和层析提取纯化NLRP3蛋白，蛋白液用超滤管离心浓缩，得到NLRP3冻存液；D、将NLRP3蛋白加入到细胞中再加EV71，检测EV71VP1的mRNA水平和蛋白水平。方法易行，操作简便，NLRP3的抗病毒作用机制是通过改变细胞内的信号通路来抑制病毒复制，抗病毒的机制多样化。

摘要： 本发明公开了一种采用二重焦磷酸测序法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3的SNP试剂盒及方法。所述试剂盒对NLRP3SNP进行检测，具体是指rs1539019C/A、rs10754558C/G单核苷酸多态性。试剂盒包括：上、下游引物、二重反应体系和条件。本发明所提供的试剂盒及检测方法对NLRP3SNP分型成功率为100%，可以实现高通量、低成本、高效、准确的对NLRP3SNP进行检测。

摘要： 本发明公开了一种含寡聚化结构域的新型冠状病毒S蛋白受体结合域融合蛋白及其用途，具体公开了一种新型冠状病毒S蛋白RBD融合蛋白，由至少一个拷贝的源自新冠病毒S蛋白的RBD多肽、寡聚化结构域、和/或内源性佐剂组成，所述的内源性佐剂为RS09佐剂，所述的寡聚化结构域选自噬菌体三聚化结构域(Foldon domain)、GCN4亮氨酸拉链序列、或人胶原蛋白三聚化结构域。该新型冠状病毒RBD融合蛋白可用于制备预防新型冠状病毒感染及感染诱发疾病的疫苗。

摘要： 本发明公开了一种多肽——含肌动蛋白结合结构域的蛋白－70.95，编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，HIV感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的含肌动蛋白结合结构域的蛋白－70.95的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明公开了一种新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF－手型钙结合蛋白36.85,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如恶性肿瘤,血液病,HIV感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的人含ATP/GTP结合结构域的EF－手型钙结合蛋白36.85的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明公开了一种新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF－手型钙结合蛋白96,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如恶性肿瘤,血液病,HIV感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的人含ATP/GTP结合结构域的EF－手型钙结合蛋白96的多核苷酸的用途。